[發明專利]一種降低核桃外植體褐變率的培養基及培養方法

有效

• 申請號: 201710517709.2
• 申請日: 2017-06-29
• 公開（公告）號: CN107318649B
• 公開（公告）日: 2019-06-28
• 發明（設計）人: 趙書崗;張志華;王紅霞;趙悅平;高儀;王雙;牛佳敏
• 申請（專利權）人: 河北農業大學
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;A01H4/00
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 王鵬

本發明公開了一種降低核桃外植體褐變率的培養基，包括蛭石和培養液；并且公開了一種降低核桃外植體褐變率的培養方法，于上述培養基中進行初代培養，并轉接于培養液的瓊脂培養基中進行繼代培養。本發明培養基及培養方法防止核桃外植體褐化的效果顯著，且適用于多種核桃品種，應用范圍廣，利于提高組培繁殖的成活率，加速良種及良砧無性苗的繁育。

技術領域

本發明涉及植物組織培養領域，具體地說，涉及一種降低核桃外植體褐變率的培養基及培養方法。

背景技術

核桃(Juglans regia L.)別名胡桃、羌桃，屬于胡桃科核桃屬植物，是一種優良的干果樹種，具有極高的經濟價值與營養價值。目前，核桃的無性繁殖普遍采用嫁接的方法，其繁殖系數低、速度慢，成活率不穩定且易受穗條數量限制，導致不少地區仍采用實生苗進行繁殖培育，嚴重限制了核桃的商業性生產；因此，利用組培快速繁殖技術，加速良種及良砧無性苗的繁育，具有很高的商業價值。

然而，核桃細胞中含有豐富的酚類物質，在組織培養過程中，酚類物質從外植體切口向外溢出，氧化產生棕褐色的醌類物質，使外植體組織變成褐色；醌類物質與外植體組織中的蛋白質發生聚合，引起酶系統的失活，從而導致外植體組織代謝活動紊亂，生長和分化停滯，最終衰老死亡；并且醌類物質擴散到培養基中也會進一步地促進外植體衰老死亡。因此，防止核桃組培外植體褐化是保證核桃組培成功關鍵所在，而核桃外植體的褐化程度與核桃選取的樹齡，剪取枝段的部分、月份，培養基的成分，抗氧化劑的種類都有關系，所以亟待設計一種解決核桃外植體褐化問題的培養基及培養方法。

發明內容

基于現有技術的不足之處，本發明提供一種降低核桃外植體褐變率的培養基及培養方法。

本發明為了實現上述目的所采取的技術方案是：

一種降低核桃外植體褐變率的培養基，其特征在于：包括蛭石和培養液。

進一步地，所述蛭石與所述培養液的配比為：每10g蛭石中混合添加有15-25mL培養液。

進一步地，所述培養液包括以下成分：硝酸銨1.4-1.5g/L；硝酸鈣1.8-2.0g/L；硝酸鋅0.015-0.02g/L；硫酸鉀1.5-1.7g/L；硫酸鎂0.6-0.8g/L；硫酸錳0.03-0.04g/L；硫酸銅0.002-0.003g/L；氯化鈣0.15-0.2g/L；磷酸二氫鉀0.2-0.5g/L；硼酸0.004-0.007g/L；鉬酸鈉0.003-0.004g/L；乙二胺四乙酸二鈉0.05-0.06g/L；硫酸亞鐵0.03-0.05g/L；鹽酸硫胺素0.001-0.003g/L；煙酸0.001-0.002g/L；甘氨酸0.001-0.003g/L；肌醇0.1-0.2g/L；蔗糖25-35g/L；6-芐氨基腺嘌呤0.0005-0.0015g/L；吲哚丁酸0.00001-0.00003g/L，pH5.5-6.0。

進一步地，所述培養液成分為：硝酸銨1.416g/L，硝酸鈣1.968g/L，硝酸鋅0.017g/L，硫酸鉀1.5592g/L，硫酸鎂0.74g/L，硫酸錳0.0335g/L，硫酸銅0.0025g/L，氯化鈣0.18625g/L，磷酸二氫鉀0.33125g/L，硼酸0.006g/L，鉬酸鈉0.0039g/L，乙二胺四乙酸二鈉0.05675g/L，硫酸亞鐵0.04225g/L，鹽酸硫胺素0.0025g/L，煙酸0.00125g/L，甘氨酸0.0025g/L，肌醇0.125g/L，蔗糖30g/L，6-芐氨基腺嘌呤0.001g/L，吲哚丁酸0.00002g/L，pH5.5-6.0。

一種降低核桃外植體褐變率的培養方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)外植體培養前處理：采集核桃未木質化新梢，選取帶有飽滿芽的枝段，剪至3-4厘米長，進行清洗和消毒；

(2)初代培養：將蛭石倒入培養瓶中，加入培養液，蓋上瓶蓋，滅菌，即配制成初代培養基；將消毒后的外植體接于初代培養基中，培養12-14天；