[發明專利]一種獸用疫苗佐劑

有效

• 申請號: 201710517268.6
• 申請日: 2017-06-29
• 公開（公告）號: CN107281487B
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發明（設計）人: 張元鵬;鄭其升;于曉明;陳瑾;侯立婷;喬緒穩;侯繼波
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K39/245;A61P31/22
• 代理公司: 南京匯盛專利商標事務所(普通合伙) 32238
• 代理人: 袁靜

本發明提供一種獸用疫苗佐劑，涉及分子生物學領域。所述獸用疫苗佐劑是氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的多肽。本發明還提供所述獸用疫苗佐劑的編碼基因、含有所述編碼基因的重組載體、重組細胞及其制備方法。通過誘導表達所述重組菌，純化，得到獸用疫苗佐劑。本發明獸用疫苗佐劑能夠顯著提高動物體內的血清抗體和黏膜抗體水平，毒性低、結構簡單、易于原核表達。

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，具體涉及一種獸用疫苗佐劑。

背景技術

封閉帶毒素（Zonula occludens toxin，ZOT）是霍亂弧菌編碼的第二個毒素，相對分子質量約45KD，ZOT本身是一種黏膜免疫佐劑。將卵白蛋白與基因工程方法表達的重組ZOT同時鼻內免疫小鼠，其引起的抗卵白蛋白免疫球蛋白的滴度是單獨用抗原免疫引起的抗體滴度的40倍。而且ZOT還使血清、陰道和腸道中抗卵白蛋白IgA滴度升高。雖然ZOT比大腸桿菌熱不穩定內毒素LT的佐劑活性稍低，但二者誘導產生的抗卵白蛋白特異性IgG亞群是相同的。二者都刺激產生了IgG1、IgG2a和IgG2b。這些實驗結果表明，ZOT可以作為一個新的微生物來源的粘膜免疫佐劑。DeltaG是ZOT蛋白C端序列，為ZOT蛋白的第265到399位氨基酸序列，分子大小為15KD。

霍亂毒素（Cholera Toxin，CT）是霍亂弧菌分泌的一種不耐熱腸毒素，它由1個A亞基（CTA）和5個B亞基（CTB）組成。CTA由240個氨基酸組成，分子質量約為27KD，CTB由103個氨基酸組成，分子質量11.6KD。CTA亞基是CT具有佐劑活性的主要活性中心，CTB與細胞結合并將CTA轉移到受體細胞膜上或胞漿內。由于CT全毒素具有毒性，而且需要CTA和CTB亞基在細菌細胞周質內組裝成具有活性的六聚體，表達量低，成本高，限制了其在生產上的應用。CTA（即1個CTA亞基）雖然被證明也具有單獨的黏膜佐劑活性，但是由于其缺少細胞受體，效率比較低。

發明內容

本發明的第一目的在于提供一種獸用疫苗佐劑，能夠顯著提高動物體內的血清抗體和黏膜抗體水平，毒性低、結構簡單、易于原核表達。

本發明的第二目的是提供所述獸用疫苗佐劑的編碼基因、含有所述編碼基因的重組載體、重組細胞。

本發明的第三目的是提供所述獸用疫苗佐劑的制備方法，該方法簡單、易于操作、成本低。

本發明的第四目的在于提供所述獸用疫苗佐劑在制備豬偽狂犬疫苗方面的應用，該佐劑能夠顯著提高動物體內的血清抗體和黏膜抗體水平。

本發明的目的采用如下技術方案實現：

一種獸用疫苗佐劑，是氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的多肽。

本發明還提供所述獸用疫苗佐劑的編碼基因。

優選的技術方案中，所述編碼基因序列如SEQ ID NO:2所示。

本發明還提供含有所述編碼基因的重組載體、重組菌。

本發明還提供制備所述獸用疫苗佐劑的方法，通過誘導表達所述重組菌，純化，得到所述獸用疫苗佐劑。

在本發明中，所述重組菌采用如下方法構建：在所述編碼基因的一端加上標簽蛋白序列，然后插入PET32a載體內，轉化大腸桿菌。

優選的技術方案中，所述標簽蛋白為His標簽蛋白。

本發明還提供所述獸用疫苗佐劑在制備豬偽狂犬疫苗方面的應用、含有所述獸用疫苗佐劑的豬偽狂犬疫苗。

在本發明中，所述疫苗還含有豬偽狂犬病毒抗原。