[發明專利]抗氧化鰱魚肝臟蛋白的制備方法

有效

• 申請號: 201710516296.6
• 申請日: 2017-06-29
• 公開（公告）號: CN107118256B
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發明（設計）人: 鄒燁;王道營;張坤;張牧焓;蔡盼盼;王立;孫沖;諸永志;徐為民
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理有限公司 11369
• 代理人: 史霞

本發明公開了一種抗氧化鰱魚肝臟蛋白的制備方法，其包括以下步驟：步驟一，將脫脂處理后的鰱魚肝臟加入磷酸緩沖液進行超聲預處理；超聲頻率24kHz，超聲功率50?100W，處理時間為3?7min；步驟二，進行滅酶處理，之后離心制得上清液和殘渣；步驟三，取上清液透析，冷凍干燥得緩沖液提取蛋白；步驟四，取殘渣加入NaOH溶液水浴滅酶15?25min；離心制得二次上清液；將二次上清液在pH8.0的Tris?HCl緩沖液中透析78h，其中每8?12h更換一次透析液，冷凍干燥得堿提蛋白。本發明利用超聲輔助緩沖溶液提取和堿提鰱魚肝臟蛋白，操作簡單，處理時間短，蛋白得率較高且所得兩種蛋白的抗氧化活性較好。

技術領域

本發明涉及一種蛋白制備方法。更具體地說，本發明涉及一種抗氧化鰱魚肝臟蛋白的制備方法。

背景技術

我國淡水水域廣闊、江河縱橫、湖泊密布，是世界上淡水水面最多的國家之一。作為全球淡水魚生產消費大國，中國近幾年在淡水漁業方面一直處于持續增長階段。在淡水養殖魚類產量中，草魚最高為537.68萬噸；鰱魚位居第二，為422.60萬噸。現有的淡水魚加工主要集中于魚糜及魚糜制品，切割加工后會產生大量的副產物，如魚腹部、魚頭以及魚內臟，約占原料魚的40％～55％，其中含有豐富的蛋白質以及大量的脂肪，如果不對其進行及時有效的加工處理，會造成資源的浪費和環境的污染。目前加工副產物對鰱魚肝臟的綜合利用低且品質較差，附加產值低。并且大部分的鰱魚肝臟被丟棄，或是加工粗糙，精深加工品相當少。鰱魚肝臟加工程度低的主要原因是魚體水分含量高，組織酶活躍，難儲藏，并且帶有濃重的魚腥味；將鰱魚肝臟進行大批量的深加工目前還存在技術問題。這些問題都極大地制約了鰱魚肝臟產品的開發利用。因此，對鰱魚肝臟進行開發利用可增加產業附加值、降低資源損耗，在我國具有十分重要的意義。

發明內容

本發明的一個目的是解決至少上述問題，并提供至少后面將說明的優點。

本發明還有一個目的是提供一種抗氧化鰱魚肝臟蛋白的制備方法，利用超聲輔助緩沖溶液提取和堿提鰱魚肝臟蛋白，操作簡單，處理時間短，蛋白得率較高且所得兩種蛋白的抗氧化活性較好。

為了實現根據本發明的這些目的和其它優點，提供了一種抗氧化鰱魚肝臟蛋白的制備方法，其包括以下步驟：

步驟一，將脫脂處理后的鰱魚肝臟加入磷酸緩沖液進行超聲預處理；超聲頻率24kHz，超聲功率50-100W，處理時間為3-7min；

步驟二，進行滅酶處理，之后離心制得上清液和殘渣；

步驟三，取上清液在pH8.0的Tris-HCl緩沖液中透析78h，每8-12h更換一次透析液，冷凍干燥得緩沖液提取蛋白；

步驟四，取殘渣加入10-20倍0.1M的NaOH溶液，置于水浴搖床中恒溫振蕩，轉速為150-300rmp/min，提取8-16h后，在90-100℃水浴鍋中滅酶15-25min；之后離心制得二次上清液；將二次上清液在pH8.0的Tris-HCl緩沖液中透析78h，其中每8-12h更換一次透析液，冷凍干燥得堿提蛋白。

優選的是，所述步驟一中脫脂處理具體為：按照體積比為1:5的比例加入10％異丙醇進行脫脂，時間為20-24h。

優選的是，所述步驟一中所述超聲預處理具體為：將脫脂后的鰱魚肝臟按照體積比1：10-20的比例加入磷酸緩沖液，pH7.0～9.0，攪拌均勻，于超聲頻率24kHz下，超聲功率50-100W時，預處理肝臟3-7min。

優選的是，所述滅酶處理具體為：將超聲預處理后的溶液密封置于集熱式恒溫振蕩器中，轉速為150-300rmp/min，提取8-16h后，在90-100℃水浴鍋中滅酶15-25min。

優選的是，所述步驟三和步驟四中透析時選用的透析袋的截留分子量為300Da。

優選的是，所述步驟二中，離心的轉速是4000rmp/min；離心時間為10-20min。