[發(fā)明專(zhuān)利]偽狂犬病病毒gC蛋白抗體、含該抗體的試劑盒及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710515776.0
• 申請(qǐng)日: 2017-06-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109212205B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-08-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 田克恭;王瑩
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 洛陽(yáng)普泰生物技術(shù)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/569
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/569;G01N33/577
• 代理公司: 北京聿宏知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11372
• 代理人: 吳大建;桑勝梅

本發(fā)明涉及特異性結(jié)合偽狂犬病病毒gC蛋白的鼠單克隆抗體的可變區(qū)序列，其為鼠單克隆抗體1B9的可變區(qū)序列或鼠單克隆抗體1F2的可變區(qū)序列；本發(fā)明還涉及由所述可變區(qū)序列中的重鏈可變區(qū)序列或其保守性變異體，和/或相應(yīng)的其各自所述可變區(qū)序列中輕鏈可變區(qū)序列或其保守性變異體組成的偽狂犬病病毒gC蛋白抗體。以所述抗體建立的免疫組化方法解決了PCR不能在組織和細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行明確定位、無(wú)法跟蹤病原在機(jī)體的動(dòng)態(tài)分布、定性及半定量檢測(cè)的問(wèn)題。含所述抗體的試劑盒基于雙單抗夾心原理準(zhǔn)確檢測(cè)PRVgC蛋白的含量，克服了PRVgC蛋白與其它蛋白串聯(lián)表達(dá)或融合表達(dá)后無(wú)法準(zhǔn)確定量、預(yù)期表達(dá)效果無(wú)法驗(yàn)證的技術(shù)難題。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于畜牧類(lèi)生物制藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及偽狂犬病病毒gC蛋白抗體、含該抗體的試劑盒及應(yīng)用。

背景技術(shù)

豬偽狂犬病，又稱Aujeszky氏病，是由皰疹病毒科(Herpesviridae)α亞科中的豬皰疹病毒I型(Suid herpesvirus type I，亦稱偽狂犬病病毒Pseudorabies virus,PRV)所引起的豬、牛、羊、犬、貓、兔、鼠、野豬、貂、熊、狐等多種家畜、野生動(dòng)物的一種以發(fā)熱、奇癢(除豬外)及腦脊髓炎為主癥的急性傳染病。

豬的偽狂犬病在我國(guó)廣泛存在，危害嚴(yán)重，是制約規(guī)模化豬場(chǎng)生產(chǎn)的主要疾病之一，可引起妊娠母豬流產(chǎn)、死胎或木乃伊胎，仔豬出現(xiàn)神經(jīng)癥狀、麻痹以及大中豬呼吸道癥狀等，特別地20周齡內(nèi)感染后死亡率高達(dá)100％。研究表明以PRVgB、gC、gD蛋白為主的亞單位疫苗能夠給免疫動(dòng)物特別是豬提供相應(yīng)的保護(hù)，不僅能使豬免遭豬偽狂犬病的侵襲，還能使豬免受豬偽狂犬病毒變異株所引發(fā)的偽狂犬病的侵襲；特別地以三種蛋白中的兩者或三者的串聯(lián)表達(dá)或融合表達(dá)效果最為顯著。但通過(guò)基因工程手段串聯(lián)表達(dá)或融合表達(dá)后的蛋白存在的難題在于僅能通過(guò)常用的BCA或Bradford方法定量表達(dá)后的總蛋白含量，而無(wú)法準(zhǔn)確定量各自蛋白表達(dá)的含量，且不能確定各蛋白是否達(dá)到預(yù)期的表達(dá)效果，從而導(dǎo)致無(wú)法配制亞單位疫苗。

目前PRV病原的臨床檢測(cè)主要為聚合酶鏈反應(yīng)PCR方法，此方法中涉及的引物、酶等多為國(guó)外進(jìn)口且較為昂貴，使得養(yǎng)殖場(chǎng)特別是小規(guī)模或散戶養(yǎng)殖望而卻步；另外此方法雖廣泛用于疫病的診斷，但由于其不能在組織和細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行明確定位、無(wú)法跟蹤病原在機(jī)體的動(dòng)態(tài)分布、半定量檢測(cè)，從而限制了PCR在病理組織學(xué)上的應(yīng)用。

根據(jù)本領(lǐng)域公知常識(shí)，能夠用于免疫組化(Immunohistochemistry，IHC)的抗體會(huì)在其使用說(shuō)明書(shū)中作出明確標(biāo)識(shí)和注明，按這些抗體的說(shuō)明所示，大多數(shù)都不能用于IHC檢測(cè)。雖然個(gè)別抗體標(biāo)明可用于IHC，但我們實(shí)際應(yīng)用發(fā)現(xiàn)并非如此。這些抗體均為研究用試劑，沒(méi)有經(jīng)過(guò)大量樣本臨床病例試驗(yàn)或驗(yàn)證，沒(méi)有關(guān)鍵的對(duì)病毒感染組織或細(xì)胞的定位檢測(cè)能力，為流行病學(xué)的準(zhǔn)確調(diào)查和后期的預(yù)防、治療造成麻煩。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供偽狂犬病病毒gC蛋白抗體、含該抗體的試劑盒及應(yīng)用。

為此，本發(fā)明第一方面提供了特異性結(jié)合偽狂犬病病毒gC蛋白的鼠單克隆抗體的可變區(qū)序列，其為鼠單克隆抗體1B9的可變區(qū)序列或鼠單克隆抗體1F2的可變區(qū)序列。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，在鼠單克隆抗體1B9的可變區(qū)序列中，重鏈可變區(qū)氨基酸序列為SEQ ID No.2所示的氨基酸序列或該序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或多個(gè)氨基酸添加、刪除、替換或修飾保守性突變獲得的保守性變異體；和/或輕鏈可變區(qū)氨基酸序列為SEQ ID No.4所示的氨基酸序列或該序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或多個(gè)氨基酸添加、刪除、替換或修飾保守性突變獲得的保守性變異體。

在本發(fā)明的另一些實(shí)施例中，在鼠單克隆抗體1F2的可變區(qū)序列中，重鏈可變區(qū)氨基酸序列為SEQ ID No.6所示的氨基酸序列或該序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或多個(gè)氨基酸添加、刪除、替換或修飾保守性突變獲得的保守性變異體；和/或輕鏈可變區(qū)氨基酸序列為SEQ ID No.8所示的氨基酸序列或該序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或多個(gè)氨基酸添加、刪除、替換或修飾保守性突變獲得的保守性變異體。