[發明專利]從杏鮑菇菌渣中提取漆酶的方法

在審

• 申請號: 201710514659.2
• 申請日: 2017-06-29
• 公開（公告）號: CN107267473A
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發明（設計）人: 梁峰;劉秀花;梁梁
• 申請（專利權）人: 商丘師范學院
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12R1/645
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙)61223
• 代理人: 俞曉明

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種從杏鮑菇菌渣中提取漆酶的方法。

背景技術

隨著食用菌產業的迅速發展，出菇后大量菌渣的綜合利用對于保護環境、實現生態農業和有機農業良性循環有著十分重要的意義，目前菌渣主要是丟棄或焚燒，不僅造成資源的浪費更導致霉菌和害蟲的增生，造成環境的污染。

杏鮑菇是一種分解纖維素、木質素、蛋白質能力較強的食用菌，其生長發育過程中能分泌較多的漆酶。采摘后的新鮮菌渣中含有大量的漆酶，回收利用后可繼續堆肥或制成飼料，既能提高菌渣的利用率，又能創造一定的經濟價值。漆酶在制漿漂白、生物燃料、污染物的降解、綠色有機物的合成、食品工業、生物傳感器、生物監測方面應用廣泛。

目前漆酶的獲取主要是從漆樹或微生物的發酵液中獲取，生產量比較有限，生產成本較高，目前還沒有從杏鮑菇菌渣中提取漆酶的方法。

發明內容

本發明的目的是提供一種原料廉價且豐富，獲取漆酶途徑簡單的方法，提高杏鮑菇菌渣的利用率，擴大了漆酶的獲取途徑。

具體的，本發明從杏鮑菇菌渣中提取漆酶的方法，按照如下步驟進行：

S1：原料預處理

選取剛收獲子實體的新鮮菌渣或陰涼處放置3天以內的菌渣，將菌渣進行粉碎，過4～10目篩；

S2：提取粗酶液

向粉碎后的菌渣中加入浸提液，浸泡12～36h，過濾除去固體，4000～5000r/min離心5～10min，收集上清液即為粗酶液；

所述浸提液為pH＝4.5～5.5的HAc-NaAc緩沖溶液，按照料液比1g：5～10ml的比例添加；

S3：濃縮、純化漆酶

用切向流超濾系統濃縮、純化粗酶液，得到漆酶酶制劑，在2～4℃儲存。

優選地，所述漆酶酶制劑進一步通過真空冷凍干燥，獲得漆酶酶粉。

更優選地，S3中，采用切向流超濾系統濃縮的具體過程為：將粗酶液先用50KD的切向流超濾膜進行過濾，收集滲透液，再用30KD的切向流超濾膜濃縮滲透液，超濾濃縮20倍。

更優選地，所制得的漆酶酶制劑或漆酶酶粉呈褐色，可溶于水，漆酶蛋白比活力為8000-10000U/g，溫度20-60℃，酶活力穩定；室溫下，pH值在4.0～6.6范圍內的酶活力變化小于15％。

本發明所采用的技術方案，具有如下有益效果：

(1)以剛收獲子實體的新鮮菌渣或陰涼處放置3天以內的菌渣為原料，進行提取，原料廉價且豐富，獲取途徑簡便，擴展了漆酶的來源，提高廢棄物菌渣的利用率。

(2)菌渣粉碎后采用pH＝4.5～5.5的HAc-NaAc緩沖溶液浸提，即可獲得漆酶，簡單易行，操作簡便，可大規模提取。

(3)采用切向流超濾系統濃縮、純化粗酶液，能夠有效截獲漆酶蛋白分子，去除雜蛋白，有利于連續化操作，提高漆酶蛋白比活力。

具體實施方式

為了使本領域技術人員更好地理解本發明的技術方案能予以實施，下面結合具體實施例對本發明作進一步說明，但所舉實施例不作為對本發明的限定。

本發明通過杏鮑菇菌渣獲得漆酶，不僅擴展了漆酶的獲取途徑，還實現了杏鮑菇菌渣的高效利用，下面就以具體的示例對本發明的技術方案進行詳細的描述。需要說明的是，下列實施例中未注明具體條件的試驗方法，通常按照常規條件操作，未注明的實驗材料來源均為市售，由于不涉及發明點，故不對其步驟進行詳細描述。

實施例1

本實施例一種從杏鮑菇菌渣中提取漆酶的方法，具體過程如下：

選取剛收獲子實體的新鮮菌渣，將這些菌渣進行粉碎，過4目左右篩；然后向粉碎后的菌渣中加入浸提液，所用浸提液為pH＝4.5～5.5的HAc-NaAc緩沖溶液，按照料液比1g：5ml添加，浸泡24h后，過濾除去固體，4800r/min離心10min，收集上清液即為粗酶液，該方法簡單，浸提率高，且便于后續收集粗酶液。接著采用切向流超濾系統對粗酶液進行濃縮，由于漆酶的分子量大概在120KD左右，所以將粗酶液先用50KD的切向流超濾膜進行過濾，截留掉一些大分子雜質，收集滲透液，再用30KD的切向流超濾膜濃縮滲透液，超濾濃縮20倍后，得到褐色的濃縮酶制劑，酶制劑2-4℃儲存。