[發明專利]一種用DSC作為活化劑的細菌多糖蛋白結合疫苗的制備方法

在審

• 申請號: 201710514530.1
• 申請日: 2017-06-29
• 公開（公告）號: CN107261130A
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發明（設計）人: 陳玉秋;錢雯;何建東;范榮坤;王麗麗;陳敏;王銘;陸偉
• 申請（專利權）人: 云南沃森生物技術股份有限公司
• 主分類號: A61K39/095
• 分類號: A61K39/095;A61K39/102;A61K39/09;A61K47/18;A61P31/04;C07K14/33;C07K14/34
• 代理公司: 昆明今威專利商標代理有限公司53115
• 代理人: 賽曉剛,廖萍

1.一種細菌多糖蛋白結合疫苗的制備方法，其特征在于，所述制備方法中細菌多糖與蛋白共價結合前，細菌多糖首先與N,N’-二琥珀酰亞胺碳酸酯(DSC)在pH為8.0-9.5堿性水溶液條件下進行活化反應，形成細菌多糖的琥珀酰亞胺碳酸酯。

2.如權利要求1所述的細菌多糖蛋白結合疫苗的制備方法，其特征在于，所述細菌多糖與N,N’-二琥珀酰亞胺碳酸酯(DSC)的質量比為1：1-1：3。

3.如權利要求1所述的細菌多糖蛋白結合疫苗的制備方法，其特征在于，所述活化反應中細菌多糖以1-20mg/mL的濃度溶解于0.1～0.3mol/L的NaCl溶液中。

4.如權利要求1所述的細菌多糖蛋白結合疫苗的制備方法，其特征在于，所述細菌多糖為b型流感嗜血桿菌多糖，奈瑟氏腦膜炎球菌血清群A群、肺炎球菌血清型1、2、4、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F、33F，副傷寒沙門菌甲型和副傷寒沙門菌乙型中的任意一種。

5.如權利要求1～4任一所述的細菌多糖蛋白結合疫苗的制備方法，其特征在于，所述細菌多糖的琥珀酰亞胺碳酸酯與雙功能鏈接劑反應形成細菌多糖衍生物，細菌多糖衍生物再與載體蛋白在縮合劑的作用下共價結合，形成細菌多糖蛋白結合物。

6.如權利要求5所述的細菌多糖蛋白結合疫苗的制備方法，其特征在于，所述雙功能鏈接劑為1,6-己二酰肼(ADH)。

7.如權利要求5所述的細菌多糖蛋白結合疫苗的制備方法，其特征在于，所述載體蛋白為破傷風類毒素(TT)、白喉毒素(DT)和白喉毒素無毒變異體(CRM197)中的任意一種。

8.如權利要求5所述的細菌多糖蛋白結合疫苗的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

步驟(1)細菌多糖與N,N’-二琥珀酰亞胺碳酸酯(DSC)在pH為8.0-9.5堿性水溶液條件下進行活化反應，形成細菌多糖的琥珀酰亞胺碳酸酯；

步驟(2)在pH為8.0-9.5堿性水溶液條件下，加入雙功能鏈接劑與細菌多糖琥珀酰亞胺碳酸酯進行單端共價連接，得到細菌多糖衍生物；

步驟(3)細菌多糖衍生物經1-30KD的膜超濾濃縮至多糖濃度為1-15mg/mL，得到超濾濃縮后的細菌多糖衍生物；

步驟(4)將超濾濃縮后的細菌多糖衍生物中加入載體蛋白，并在縮合劑作用下反應，形成細菌多糖蛋白結合物，超濾濃縮后的細菌多糖衍生物質量與載體蛋白的質量比為1：0.6-1：2；

步驟(5)用凝膠柱進行純化，收集V₀附近的吸收峰，除菌過濾即獲得純化后的細菌多糖蛋白結合物原液，即為細菌多糖蛋白結合疫苗。

9.一種細菌多糖蛋白疫苗，其特征在于，所述疫苗采用6～8任一所述的制備方法得到的。

10.N,N’-二琥珀酰亞胺碳酸酯在活化細菌多糖中的應用。