[發明專利]與偽狂犬病病毒gD蛋白結合的單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 201710514485.X
• 申請日: 2017-06-29
• 公開（公告）號: CN109206509B
• 公開（公告）日: 2021-07-20
• 發明（設計）人: 田克恭;王瑩
• 申請（專利權）人: 洛陽普泰生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/08
• 分類號: C07K16/08;G01N33/535;G01N33/569;G01N33/577;G01N33/68;A61K39/42;A61P31/22
• 代理公司: 北京聿宏知識產權代理有限公司 11372
• 代理人: 吳大建;方莉

本發明涉及特異性結合偽狂犬病病毒gD蛋白的鼠單克隆抗體的可變區序列，其為鼠單克隆抗體3B6的可變區序列或鼠單克隆抗體5G7的可變區序列；本發明還涉及由鼠單克隆抗體3B6可變區序列中的重鏈可變區序列或其保守性變異體，和/或輕鏈可變區序列或其保守性變異體組成的抗體，及由鼠單克隆抗體5G7可變區序列中的重鏈可變區序列或其保守性變異體，和/或輕鏈可變區序列或其保守性變異體組成的抗體。含所述抗體的ELISA檢測試劑盒，克服了PRVgD蛋白與其它蛋白串聯表達或融合表達后無法準確定量、預期表達效果無法驗證的技術難題，解決了配制疫苗的關鍵問題。同時，含所述抗體的藥物組合物，具有廣譜性。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及與偽狂犬病病毒gD蛋白結合的單克隆抗體及其應用。

背景技術

偽狂犬病，又稱Aujeszky氏病，是由皰疹病毒科(Herpesviridae)α亞科中的豬皰疹病毒Ⅰ型(Suid herpesvirus 1strain，亦稱偽狂犬病病毒Pseudorabies virus，PRV)所引起的豬、牛、羊、犬、貓、兔、鼠、野豬、貂、熊和狐等多種家畜、野生動物的一種以發熱、奇癢(除豬外)及腦脊髓炎為主癥的急性傳染病。

豬的偽狂犬病在我國廣泛存在，危害嚴重，是制約規模化豬場生產的主要疾病之一，可引起妊娠母豬流產、死胎或木乃伊胎，仔豬出現神經癥狀、麻痹、特別地20周齡內感染后100％死亡率，以及大中豬呼吸道癥狀等。研究表明以PRVgB、gC、gD蛋白為主的亞單位疫苗能夠給免疫動物特別是豬提供相應的保護，不僅能使豬免遭豬偽狂犬病的侵襲，還能使豬免受豬偽狂犬變異株所引發的偽狂犬病，特別地以三種蛋白中的兩者或三者的串聯表達或融合表達效果最為顯著。但通過基因工程手段串聯表達或融合表達后的蛋白存在的難題在于，其僅能通過常用的BCA或Bradford方法定量表達后的總蛋白含量，無法準確定量各自蛋白表達的含量，進而不能確定各蛋白是否達到預期的表達效果，導致無法追溯所配制的亞單位疫苗免疫動物后產生效果所對應的具體成分含量。

犬也是對PRV較為敏感的動物，截止目前犬感染PRV引起的發病和死亡屢有發生。例如劉蕾等在中國畜牧獸醫學會小動物醫學分會第六次學術研討會暨中國畜牧獸醫學會獸醫外科學分會第十八次學術研討會上報道的“關注偽狂犬病患犬，它就在你面前”，公開了犬由于食用患有偽狂犬病的豬肉而發生偽狂犬病，并且從腦組織中擴增出了目的基因片段。犬感染PRV后潛伏期為3-6天，一旦發病，多在36小時內死亡。這一危害日趨嚴重，給眾多養犬者、養殖業帶了較大的經濟損失和嚴重的心理創傷。因此，亟需研發一種預防和/或治療該病的藥物，該藥物可用于多種患病動物，不受動物種屬的限制。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對現有技術的不足提供了能夠與偽狂犬病毒gD蛋白結合的抗體。含所述抗體的ELISA檢測試劑盒，克服了PRVgD蛋白與其它蛋白串聯表達或融合表達后無法準確定量、預期表達效果無法驗證的技術難題，解決了配制疫苗的關鍵問題。同時，含所述抗體的藥物組合物，可以不分種屬地預防和/或治療豬源、犬源所引發的偽狂犬病。

為此，本發明第一方面提供了特異性結合偽狂犬病病毒gD蛋白的可變區序列，其為鼠單克隆抗體3B6的可變區序列，所述鼠單克隆抗體3B6的可變區序列中，重鏈可變區氨基酸序列為：序列SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，或序列SEQ ID NO.2經一個或多個氨基酸添加、刪除、替換或修飾獲得的保守性變異體；輕鏈可變區氨基酸序列為：序列SEQ IDNO.4所示的氨基酸序列，或序列SEQ ID NO.4經一個或多個氨基酸添加、刪除、替換或修飾獲得的保守性變異體；

和/或為鼠單克隆抗體5G7的可變區序列，所述鼠單克隆抗體5G7的可變區序列中，重鏈可變區氨基酸序列為：序列SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列，或序列SEQ ID NO.6經一個或多個氨基酸添加、刪除、替換或修飾獲得的保守性變異體；輕鏈可變區氨基酸序列為：序列SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列，或序列SEQ ID NO.8經一個或多個氨基酸添加、刪除、替換或修飾獲得的保守性變異體。