[發明專利]一種通過基因組編輯創制番茄雄性不育系的方法及其應用有效
| 申請號： | 201710514085.9 | 申請日： | 2017-06-29 |
| 公開（公告）號： | CN109207505B | 公開（公告）日： | 2020-03-17 |
| 發明（設計）人： | 李常保;杜敏敏;李傳友;鄧磊;周明;溫常龍 | 申請（專利權）人： | 北京市農林科學院;中國科學院遺傳與發育生物學研究所 |
| 主分類號： | C12N15/82 | 分類號： | C12N15/82;C12N15/29 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245 | 代理人： | 關暢 |
| 地址： | 100097 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 通過 基因組 編輯 創制 番茄 雄性不育 方法 及其 應用 | ||
1.一種培育番茄雄性不育系的方法，包括如下步驟：利用CRISPR/Cas9系統對受體番茄基因組中的育性基因進行編輯，進而使所述育性基因功能喪失，得到番茄雄性不育系；所述育性基因為編碼Solyc03g053130蛋白的基因；所述Solyc03g053130蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：
所述CRISPR/Cas9系統包括sgRNA；
所述sgRNA的靶基因片段的核苷酸序列 如SEQ ID NO：2所示。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：
所述編輯的方法為將向所述受體番茄中導入番茄基因組編輯的載體；
所述番茄基因組編輯的載體為將SEQ ID NO：2所示的DNA分子插入pKSE401載體的BsaI的酶切位點間，且保持pKSE401載體的其他序列不變得到的載體。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：所述方法還包括篩選Solyc03g053130純合突變體的步驟。
5.如下（1）-（4）中任一種生物材料：
（1）權利要求3中所述的番茄基因組編輯的載體；
（2）含有權利要求3中所述的番茄基因組編輯的載體的微生物轉化體；
（3）權利要求2中所述的靶基因片段；
（4）SEQ ID NO：9所示的
6.如下任一所述生物材料在培育番茄雄性不育系中的應用；
（1）權利要求3中所述的番茄基因組編輯的載體；
（2）含有權利要求3中所述的番茄基因組編輯的載體的微生物轉化體。
7.權利要求5中所述的生物材料或權利要求1-3中任一所述的方法獲得的番茄雄性不育系在番茄育種中的應用。
8.Solyc03g053130蛋白或其編碼基因在培育番茄雄性不育系中的應用；所述Solyc03g053130蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示。
9.一種鑒定或輔助鑒定待測番茄是否為雄性不育株的方法，包括如下步驟：檢測待測番茄的基因型，根據基因型判斷待測番茄是否為雄性不育株；
若待測番茄的基因型為T/T，則待測番茄為或候選為雄性不育株；
若待測番茄的基因型為G/G或T/G，則待測番茄為或候選為雄性可育株；
所述T/T基因型為番茄Solyc03g053130基因的第1606位均為T的純合體；
所述G/G基因型為番茄Solyc03g053130基因的第1606位均為G的純合體；
所述T/G基因型為番茄Solyc03g053130基因的第1606位為T和G的雜合體；
所述Solyc03g053130基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于：
所述檢測待測番茄的基因型的方法為用成套引物對待測番茄進行PCR擴增，得到擴增產物，檢測所述擴增產物中SNP1606位點基因型；
所述成套引物由引物1、引物2和引物3組成；
所述引物1為SEQ ID NO：10所示的DNA分子；
所述引物2為SEQ ID NO：11所示的DNA分子；
所述引物3為SEQ ID NO：12所示的DNA分子；
采用ArrayTape平臺檢測所述擴增產物中SNP1606位點基因型；
所述SNP1606位點為番茄Solyc03g053130基因的第1606位。
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