[發(fā)明專利]乳粉中金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)樣品及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710512083.6
• 申請(qǐng)日: 2017-06-28
• 公開（公告）號(hào): CN107236784A
• 公開（公告）日: 2017-10-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙紅陽(yáng);盧行安;劉莉莉;孫英健;王秀君;王偉;王建華;凌莉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): C12Q1/14
• 分類號(hào): C12Q1/14;C12N1/20;C12N1/04;C12R1/19;C12R1/445;C12R1/22;C12R1/085;C12R1/01
• 代理公司: 大連博晟專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙)21236
• 代理人: 楊迪

1.乳粉中金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)樣品，其特征是：包括目標(biāo)菌和背景菌群，所述目標(biāo)菌為金黃色葡萄球菌，所述背景菌群由弗氏檸檬酸桿菌、大腸埃希氏菌、肺炎克雷伯菌、蠟樣芽胞桿菌組成。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的乳粉中金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)樣品，其特征是：所述樣品以海藻糖、脫脂奶粉和無(wú)菌水為基質(zhì)，其中海藻糖的體積分?jǐn)?shù)為12％、脫脂奶粉的體積分?jǐn)?shù)為15%。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的乳粉中金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)樣品，其特征是：所述樣品中目標(biāo)菌的目標(biāo)濃度為10²～10³ CFU/mL，背景菌群的目標(biāo)濃度為10³ CFU/mL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的乳粉中金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方法，其特征是：包括樣品添加菌株的選擇、凍干保護(hù)劑的配制、樣品凍干、樣品的均勻性和穩(wěn)定性試驗(yàn)四個(gè)步驟，其中樣品凍干過(guò)程為：菌株復(fù)蘇傳代—增菌—菌懸液配制—凍干和包裝—儲(chǔ)存，具體過(guò)程為：

（1）菌株復(fù)蘇傳代

將標(biāo)準(zhǔn)菌株加入到營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基中，在36±1℃下使其復(fù)蘇和生長(zhǎng)，并對(duì)復(fù)蘇的菌株進(jìn)行鑒定；

（2）增菌

目標(biāo)菌培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期末，背景菌群培養(yǎng)至穩(wěn)定期，從斜面刮取菌落，加到10mL的凍干保護(hù)劑中制成相應(yīng)單一菌種的菌液；

（3）菌懸液配制

將上一過(guò)程得到的菌液與凍干保護(hù)劑混合，按目標(biāo)菌的目標(biāo)濃度10²～10³ CFU/mL和背景菌群的目標(biāo)濃度10³ CFU/mL配制菌懸液，分別配制目標(biāo)菌的菌懸液和4個(gè)背景菌的菌懸液，背景菌按1:1的體積比例混合形成背景菌群懸液，再將目標(biāo)菌懸液和背景菌群懸液按1：1體積比混合，置于磁力攪拌器上不斷攪拌下分裝到樣品瓶中，加上瓶塞，但要留有空隙，不要蓋實(shí)；

（4）凍干和包裝

將裝有混合菌懸液的樣品瓶開蓋放入凍干機(jī)中，冷凍干燥50～55h，當(dāng)樣品冷凍干燥結(jié)束后，直接進(jìn)行箱內(nèi)加塞，關(guān)閉機(jī)器，樣品瓶中樣品為真空狀態(tài)；

（5）儲(chǔ)存

將樣品放置在-18℃條件下避光保存，從全部樣品中隨機(jī)挑選樣品發(fā)放給實(shí)驗(yàn)室或進(jìn)行均勻性和穩(wěn)定性試驗(yàn)。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的乳粉中金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方法，其特征是：所述凍干保護(hù)劑為含有海藻糖和脫脂奶粉的無(wú)菌水，其中體積分?jǐn)?shù)分別為：海藻糖12%、脫脂奶粉15%。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的乳粉中金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方法，其特征是：所述樣品的均勻性和穩(wěn)定性試驗(yàn)按照GB/T 15000.3-2008《標(biāo)準(zhǔn)樣品工作導(dǎo)則（3） 標(biāo)準(zhǔn)樣品 定值的一般原則和統(tǒng)計(jì)方法》進(jìn)行。