[發(fā)明專利]溫敏響應(yīng)高分子陣列的制備方法及其在樣品預(yù)處理中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710512030.4
• 申請(qǐng)日: 2017-06-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107153092B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉穎;鞠熀先;孟瀟;成全
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N27/62
• 分類號(hào): G01N27/62;G01N1/28;C08F120/54
• 代理公司: 南京知識(shí)律師事務(wù)所 32207
• 代理人: 施婷婷

1.溫敏響應(yīng)高分子陣列的應(yīng)用，其特征在于，利用光影印技術(shù)和炔基與巰基的點(diǎn)擊化學(xué)技術(shù)，在氧化銦錫玻片構(gòu)建羥基親水性微陣列；利用羥基與2-溴異丁酰溴間的共價(jià)反應(yīng)形成原位自由基聚合反應(yīng)的引發(fā)劑，再在溴化亞銅和2,2’-聯(lián)吡啶的催化下，單體N-異丙基丙烯酰胺在氧化銦錫玻片表面聚合生成所述溫敏反應(yīng)高分子陣列，即高分子聚(N-異丙基丙烯酰胺)的可控親水性陣列；所述溫敏反應(yīng)高分子陣列可通過(guò)溫度轉(zhuǎn)變自發(fā)進(jìn)行表面除鹽及樣品富集，并用于對(duì)樣品的預(yù)處理。

2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述羥基親水性微陣列的制備：1-硫代甘油通過(guò)光引發(fā)劑安息香二乙醚，使巰基與氧化銦錫玻片上的炔基共價(jià)結(jié)合，形成羥基親水性微陣列。

3.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，利用表面原位生成的所述引發(fā)劑，在常溫有機(jī)相條件下引發(fā)表面原子轉(zhuǎn)移自由基聚合反應(yīng)。

4.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，當(dāng)?shù)陀谂R界溫度時(shí)，所述溫敏響應(yīng)高分子陣列的親水性作用使得樣品匯聚在氧化銦錫玻片表面，而高于臨界溫度時(shí)，樣品中蛋白質(zhì)或肽段通過(guò)疏水作用與疏水性的所述溫敏響應(yīng)高分子陣列相吸附，而共存的鹽和污染物則被沖走，從而實(shí)現(xiàn)樣品靶上自除鹽和高效富集，即完成對(duì)樣品的預(yù)處理。

5.如權(quán)利要求1或4所述的應(yīng)用，其特征在于，對(duì)樣品的預(yù)處理包括如下步驟：

(1)將樣品溶液滴在含所述高分子聚(N-異丙基丙烯酰胺)的可控親水性陣列的氧化銦錫玻片上，并在60℃條件下溫育30min-1h；

(2)用沖洗液對(duì)樣品進(jìn)行2-3次沖洗；將基質(zhì)溶液滴在樣品處，并在4℃下蒸干溶液；

(3)通過(guò)基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜進(jìn)行信號(hào)采集，從質(zhì)譜圖中得到樣品蛋白質(zhì)或肽段信息。

6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述樣品溶液的體積為1μL；沖洗液為60℃超純水，體積為2μL；基質(zhì)溶液的配比如下：α-氰基-4-羥基肉桂酸固體溶解到含有體積百分?jǐn)?shù)分別為50％的乙腈、0.01％的三氟乙酸和49.9％的超純水的溶劑中，配成最終濃度為10mg/ml的溶液，體積為1μL。