[發明專利]一種鑒別6種紫檀屬木材的DNA組合條形碼及其鑒別方法和應用

有效

• 申請號: 201710511802.2
• 申請日: 2017-06-27
• 公開（公告）號: CN107164525B
• 公開（公告）日: 2018-07-06
• 發明（設計）人: 焦立超;殷亞方;何拓;余敏;劉波;張永剛;姜笑梅
• 申請（專利權）人: 中國林業科學研究院木材工業研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京和信華成知識產權代理事務所(普通合伙) 11390
• 代理人: 胡劍輝

1.一種鑒別6種紫檀屬木材的DNA組合條形碼，其特征在于，所述DNA組合條形碼是matK+ndhF-rpl32+ITS2組合條形碼；所述matK+ndhF-rpl32+ITS2序列如SEQ ID No. 9-14所示；所述6種紫檀屬木材分別為安哥拉紫檀Pterocarpus angolensis DC.、印度紫檀Pterocarpus indicus Willd.、大果紫檀Pterocarpus macrocarpus Kurz、檀香紫檀Pterocarpus santalinus L.f.、非洲紫檀Pterocarpus soyauxii Taub. 及染料紫檀Pterocarpus tinctorius Welw.。

2.一種鑒別6種紫檀屬木材的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將木材樣品研磨處理成木粉；

（2）提取步驟（1）所得的木粉樣品的DNA；

（3）以步驟（2）提取得到的DNA為模板，PCR擴增所述matK、ndhF-rpl32和ITS2條形碼序列；

（4）將步驟（3）得到的PCR擴增產物進行測序，得到matK、ndhF-rpl32和ITS2序列，并對其進行組合；

（5）以步驟（4）所得的matK+ndhF-rpl32+ITS2條形碼組合與權利要求1中所述6種紫檀屬木材的matK+ndhF-rpl32+ITS2序列進行聚類分析，構建系統發育進化樹，鑒別樹種。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，擴增matK序列的正反引物如SEQ ID No.1-2所示，擴增ndhF-rpl32序列的正反引物如SEQ ID No. 3-4所示 ，擴增ITS2序列的正反引物如SEQ ID No.5-6所示。

4.如權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟（3）所述PCR擴增反應體系為0.5-3U DNA聚合酶、1.0-2.0mM MgCl₂、200μM單一dNTP、0.1-5.0μM單一引物、pH7.0-8.0的0.1-1.5mg/mL牛血清白蛋白和10-1000ng模板DNA；PCR反應條件為94-96°C預變性0.5-10min；94-96°C變性0.05-2min，40-65°C退火0.5-2min，72°C延伸0.3-2min，循環20-50次；72°C終延伸2-15min。

5.如權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟（5）中系統發育進化樹法基于鄰接法鑒別。

6.權利要求1所述DNA組合條形碼，或權利要求2~5任意一項所述鑒別6種紫檀屬木材的方法在紫檀屬木材鑒別中的應用。