[發明專利]磁固相微萃取結合碳量子點熒光增敏檢測牛奶中氧氟沙星方法

有效

• 申請號: 201710504648.6
• 申請日: 2017-06-28
• 公開（公告）號: CN107688011B
• 公開（公告）日: 2020-01-10
• 發明（設計）人: 楊亞玲;華建豪;楊德志
• 申請（專利權）人: 昆明理工大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;C09K11/65;B82Y20/00;B82Y40/00
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1.一種磁固相微萃取結合碳量子點熒光增敏檢測牛奶中氧氟沙星的方法，其特征在于，具體步驟如下：

(1)標準工作曲線的繪制：采用檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液配置8個濃度在0.01～10 μmol/L范圍內的氧氟沙星標準溶液，每個標準溶液5mL，然后加入水溶性氮摻雜熒光碳量子點溶液，渦旋混勻靜置后，于熒光分光光度計上，激發波長為344nm，發射波長為423nm測定熒光強度，以熒光增強強度對其相應濃度作圖進行回歸分析，即得標準工作曲線，由此得到氧氟沙星的線性回歸方程；

(2)樣品制備：取5-10mL牛奶，加入10-15mL甲醇-水-甲酸提取液、l-3mL質量濃度4％的三氯乙酸乙腈溶液，渦旋1-3 min，超聲5-10min，10000r/min下離心5-10 min，取上清液，避光保存于4℃冰箱待分析測定，其中甲醇-水-甲酸提取液是按體積比28:72:0.1的比例將甲醇、水、甲酸混勻制得；

(3)樣品測定：取步驟（2）的上清液，加入磁性納米材料，渦旋使其充分混勻后，通過外加磁鐵進行磁分離，棄去磁性納米材料，取出上清液1-2mL，用檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液調pH至6.5-7.5并定容至5mL，加入水溶性氮摻雜熒光碳量子點溶液，渦旋混勻靜置后，于熒光分光光度計上，激發波長為344nm，發射波長為423nm測定熒光強度，代入步驟(1)回歸方程，計算出樣品中氧氟沙星的含量；

所述水溶性氮摻雜熒光碳量子點的制備方法為稱取10.0-15.0g聚乙烯亞胺液體，加入到90mL超純水中，超聲5-10min使其充分混勻，并轉移至聚四氟乙烯反應釜，于200-250℃加熱5-10h，自然冷卻至室溫后，先用孔徑為0.22μm濾膜過濾，后用截留分子量為3000-3500Da的透析袋進行透析處理24h，得到水溶性氮摻雜熒光碳量子點；

所述磁性納米材料的制備方法如下：

（1）取2.05-2.50g硫酸亞鐵銨和1.41-2.00g三氯化鐵，用50mL去離子水溶解后，氮氣保護下，水浴加熱至75-85℃之后，加入5-7mL體積百分比濃度28%的氨水，繼續攪拌反應30min，冷卻至室溫，用去離子水洗滌3次，在外加磁鐵作用下分離，即得磁性Fe₃O₄；

（2）在磁性Fe₃O₄中加入無水乙醇120-150mL、去離子水30-50mL，用氨水調pH至9后，加入800-1000μL的正硅酸四乙酯，氮氣保護下，室溫攪拌5h；產物在外加磁鐵作用下分離，并依次用去離子水和乙醇各洗滌3次，即得SiO₂包覆的Fe₃O₄，記為Fe₃O₄@SiO₂；

（3）取2.0-3.0g Fe₃O₄@SiO₂加入到50mL濃度為4-5mol/L的HNO₃中，酸化5-10min之后，用去離子水沖洗三次，在外加磁鐵作用下分離；將1.0-2.0g 十二烷基硫酸鈉溶于150mL去離子水中，之后加到上述分離后的酸化磁性材料中，調pH為2.0-3.0，攪拌15-20min；再加入2-(5-溴-吡啶偶氮)-5-二乙氨基苯酚5-8mL，并調pH至8.0，攪拌15-20min；最后，在外加磁鐵作用下分離，用去離子水和乙醇各洗滌3次，得到2-(5-溴-吡啶偶氮)-5-二乙氨基苯酚及十二烷基硫酸鈉修飾的Fe₃O₄磁性納米材料。

2.根據權利要求書1所述的磁固相微萃取結合碳量子點熒光增敏檢測牛奶中氧氟沙星的方法，其特征在于：檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液pH為6.5-7.5。

3.根據權利要求書1所述的磁固相微萃取結合碳量子點熒光增敏檢測牛奶中氧氟沙星的方法，其特征在于：磁性納米材料用量為5-10mg。

4.根據權利要求書1所述的磁固相微萃取結合碳量子點熒光增敏檢測牛奶中氧氟沙星的方法，其特征在于：水溶性氮摻雜熒光碳量子點用量為150μL。

5.根據權利要求書1所述的磁固相微萃取結合碳量子點熒光增敏檢測牛奶中氧氟沙星的方法，其特征在于：渦旋混勻靜置是指渦旋混勻0.5-2 min，然后靜置10-20 min。