[發明專利]一種外傷性視神經損傷動物模型的構建方法

在審

• 申請號: 201710504420.7
• 申請日: 2017-06-28
• 公開（公告）號: CN107440812A
• 公開（公告）日: 2017-12-08
• 發明（設計）人: 吳文燦;南開輝;吳恩德;陳園園;周靜
• 申請（專利權）人: 溫州醫科大學附屬眼視光醫院
• 主分類號: A61D1/00
• 分類號: A61D1/00;A01K67/027
• 代理公司: 溫州金甌專利事務所(普通合伙)33237
• 代理人: 王堅強

技術領域

本發明具體涉及疾病動物模型技術領域，具體涉及一種外傷性視神經損傷動物模型的構建方法。

背景技術

視神經介于眼球與顱腦之間，穿行于蝶竇的外側壁，深邃而隱蔽。因其自身解剖結構的特殊性、復雜性與個體差異性，迄今為止，對外傷性視神經損傷（ITON）的發生機制研究尚停留在“力的傳導”這一假說，即認為外力作用于顱頜面，特別是眉弓外上方的顳部后，鈍力沿著蝶骨嵴向內后方傳遞，直至視神經管外側蝶骨小翼根部，最終在蝶竇頂壁和/或篩竇外側壁等骨質薄弱處匯合而形成“沖擊”而引起視神經管周邊薄弱的骨質變形、斷裂和移位，最終導致視神經軸索損傷。但外力究竟如何作用，作用后視神經內部組織結構究竟發生了何種反應，視神經如何應對此種應激變化，這些具體機制目前尚無定論。因此，制備一種可控的、定量的、仿生態的ITON動物模型對探究ITON的病理生理學機制，尋求有效的促視神經再生修復方法并推廣應用顯得尤為重要。

盡管已建立了多種視神經損傷動物模型，但均難以代表ITON的真實臨床受損狀態，阻礙了ITON的發病機制及治療策略的研究。目前視神經損傷動物模型制備主要有以下幾種：① 視神經橫斷損傷模型，即將視神經于眶內段或視交叉前直接全部或部分切斷，造成全部或部分視網膜神經節細胞（Retinal ganglion cells, RGCs）軸索完全離斷；②視神經夾持壓迫損傷模型，即暴露視神經眶內段后，利用血管鉗等直接鉗夾或壓迫；③視神經牽拉損傷模型，即暴露視神經眶內段后沿平行或垂直視神經管方向將視神經過度拉伸而造成彌漫性視神經軸索損傷；④視神經撞擊損傷模型。根據造模方法又分為閉合性和開放性兩種：（1）閉合性，即用頭盔固定動物頭部，通過加速沖擊儀撞擊動物頭部而造成ITON。此種模型與臨床ITON比較相符，但因為動物顱骨、眶骨及視神經管解剖結構的異質性，以及閉合性損傷時外力作用部位、大小、方向差異等，制備的成功率極低，且動物常合并嚴重顱腦損傷死亡；（2）開放性，即切開眶周皮膚及軟組織，暴露視神經孔，利用外力撞擊近視神經孔部位的眶骨而導致視神經損傷。此法外力撞擊部位主要為眶尖部視神經管內側壁骨質，此處骨質菲薄，很難通過“力的傳導”而損傷視神經。即使存在“力的傳導”，但因為視神經管在前顱底的走向不同，從力的傳導介質、作用性質與方向、大小等分析亦不同于臨床狀態ITON。

理想的ITON動物模型應滿足以下特點：（1）盡可能接近人類ITON的臨床狀態。既往通過切斷、鉗夾壓迫、過度牽拉、以及眶內側壁或視神經孔前方撞擊等方法，無論從受力位置、外力作用特點、視神經損傷部位與程度等都與ITON臨床狀況不同。ITON是閉合性顱腦損傷所并發，主要系作用于眉弓外上方顳側的鈍力通過顳骨傳導，導致顱骨因彈性發生“形變”后的損傷，其主要致傷部位在視神經管內段，而非眶內段。因此，制作時必須模擬此種臨床狀態，采取外界撞擊力量導致視神經管內段損傷；（2）致傷率高，定位準確，可控性好，可精確量化分級，模型穩定，重復性好，且對動物創傷小，盡可能避免或減輕顱腦損傷，動物死亡率低;（3）選擇實驗動物的視神經解剖盡可能類似于人類，有一定實用價值，易于標準化。既往采用的大鼠、兔、猴、貓等與人類相差甚遠，而狗、豬、羊等鼻竇、前顱底發育較好，解剖結構類似于人類，有可能成為理想的實驗動物對象。

發明內容

為了解決現有技術的不足，本發明的提供了一種外傷性視神經損傷動物模型的構建方法。

本發明采用的技術解決方案是：一種外傷性視神經損傷動物模型的構建方法，包括以下步驟：

（1）選擇健康無眼疾成年比格犬，進行頭部CT掃描，保存掃描數據；

（2）利用內窺鏡下經篩竇與蝶竇手術徑路，充分暴露動物的視神經管內段及其鄰近的前顱底、后組篩竇與蝶竇外側壁；

（3）通過可控的撞擊力撞擊充分暴露的視神經管內段，造成視神經損傷，模擬臨床ITON損傷狀態，獲得可控性的、可量化的ITON仿生態彈性損傷動物模型。

所述的構建方法還包括以下步驟：將獲得的ITON仿生態彈性損傷動物模型定期進行相對傳入性瞳孔障礙檢查和眼電生理檢查，考察視網膜功能及視覺通路的完整性，確認造模成功。

所述的成年比格犬為成年雄性比格犬。

所述的撞擊充分暴露的視神經管內段的撞擊力為5-50N。