[發明專利]基于超聲破碎的食用菌液體菌種制菌方法

在審

• 申請號: 201710503607.5
• 申請日: 2017-06-28
• 公開（公告）號: CN109136094A
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發明（設計）人: 王磊
• 申請（專利權）人: 王磊
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了基于超聲破碎的食用菌液體菌種制菌方法，包括：將所保藏母種斜面活化，活化菌種轉至平板培養，長出菌落后用打孔器于菌落近邊緣打孔，挑取瓊脂塊菌種至液體培養基培養，然后利用超聲波細胞破碎儀對培養后的菌種進行破碎，得到含大量菌絲片段的均質化液體菌種，作為液體深層發酵或作為制備原種、栽培種或代料栽培的菌種。均質化液體菌種也可繼續擴大培養后再次超聲破碎獲得更大量液體菌種。本發明所公布的液體菌種制作方法具有制作簡便、快速、高效、不易染菌等特點，所制備的菌種具有生長點多、菌種用量少、生長速度快以及便于自動化接種的實現等優點，具有極大的應用前景。

技術領域

本發明屬于食用菌培養技術領域，具體涉及基于超聲破碎的食用菌液體菌種制菌方法。

背景技術

食用菌是一類富有營養與藥用價值的大型真菌，它主要利用農業、林業以及工業生產中所產生的下腳料如稻草、玉米芯、棉子殼、木屑等可再生廢棄物作為原料進行生產，轉廢為寶，生產的各種菇類可供人類食用和藥用。由于這些原材料均屬可再生資源，因此食用菌產業具有可持續發展的特點，與此同時這些廢棄物的利用還可減少其對環境的破壞作用，可以說食用菌是地球生態循環的關鍵組成部分。目前，食用菌生產在我國正快速發展，已成為我國農業生產的重要組成部分，我國也因此成為世界最重要的食用菌生產國。

目前食用菌生產主要采用代料栽培模式，通常采用代料基質培養的固體菌種作為接種物，但固體菌種具有生產周期長、菌齡不一致、接種勞動強度大以及不利于機械化接種等缺點。與固體菌種相比，液體菌種具有生產周期短、生產自動化水平高、菌齡均一、萌發吃料快等優點，因此，食用菌液體菌種用于食用菌栽培的前景十分看好，是今后發展的必然趨勢，近年來液體菌種開始應用于少數菇類的生產正是這一趨勢的體現，取得了顯著的效益。此外，食用菌液體深層發酵開始應用于多糖、酶等活性產物生產，有可能成為食用菌生產新方法，其過程也離不開液體菌種的制備。

食用菌液體菌種制備通常先將菌種活化，再轉至平板培養，待菌落長好后用打孔器于培養菌落近邊緣打孔，挑取瓊脂塊進行液體培養，作為液體菌種，或以此作為菌種培養二級種，以擴大菌種量，視菌種需要量可進一步搖瓶或發酵罐擴大培養。由于食用菌液體培養時主要以菌絲球形式生長，直接將液體菌種作為接種種子時生長點極少，致使生長速度慢或需要加大接種量，此外，原始液體菌種接種時難于準確控制接種量，以及由于菌絲球過大不利于機械化接種的實現。為提高液體菌種生長點、便于接種以及準確控制接種量，少數人采用研磨或機械均質法將原始液體菌種均質處理后再用于接種，但這兩種方法均易導致菌種污染，且均質程度不夠高，因此，開發更有效的食用菌液體菌種均質方法具有十分重要的意義。

發明內容

本發明的目的在于提供一種利用超聲波破碎技術獲得食用菌液體菌種的方法，以提高液體菌種的使用效率和便于自動化接種。

為了實現以上目的，本發明的技術方案如下：

本發明基于超聲破碎的食用菌液體菌種制菌方法，包括以下步驟：

(1)活化保藏菌種；

(2)活化菌種轉至馬鈴薯葡萄糖瓊脂平板培養基(PDA)培養；

(3)待長出菌落后用打孔器于菌落近邊緣打孔；

(4)挑取打孔后瓊脂塊菌種至裝有液體培養基的搖瓶培養；

(5)培養后利用超聲波細胞破碎儀破碎，得到含大量菌絲片段的均質化液體菌種，數量級擴增接種物的生長點，作為液體深層發酵或制作原種和栽培種的接種物以及代料栽培的接種物。

其中，所述步驟(5)的均質化液體菌種，可以繼續擴大培養后再次進行超聲波破碎，得到更大量的菌種。

具體如下：

(1)保藏的食用菌母種接種至新鮮斜面，25-27℃培養活化7-10d；(2)活化菌種接種至PDA平板，25-27℃培養5-10d；