[發(fā)明專利]干擾BTF3在抑制黑色素瘤細(xì)胞增殖中的新用途

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• 申請日: 2017-06-27
• 公開（公告）號: CN107334777A
• 公開（公告）日: 2017-11-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳荻;于鴻;郭軍;李永琦;涂正坤;尹起亮;崔安
• 申請（專利權(quán)）人: 吉林大學(xué)第一醫(yī)院;吳荻
• 主分類號: A61K31/7105
• 分類號: A61K31/7105;A61K48/00;A61K45/00;A61P35/00;C12Q1/68
• 代理公司: 天津市尚文知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司12222
• 代理人: 張東浩

1.干擾BTF3在抑制黑色素瘤細(xì)胞增殖中的用途。

2.下調(diào)BTF3表達(dá)或BTF3活性的物質(zhì)在制備診斷和/或治療黑色素瘤的藥物或裝置中的用途。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述下調(diào)BTF3表達(dá)或BTF3活性的物質(zhì)的制備包括以下步驟：

1）shRNA靶點設(shè)計，目的基因BTF3 RNAi慢病毒構(gòu)建；

2）目的基因RNAi慢病毒包裝，得到慢病毒；

所述慢病毒即為所述下調(diào)BTF3表達(dá)或BTF3活性的物質(zhì)。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于，所述步驟1）包括：在完成RNA干擾靶點設(shè)計后，合成含干擾序列的單鏈DNA oligo，退火配對產(chǎn)生雙鏈DNA；隨后通過其兩端酶切位點直接連入酶切后的慢病毒載體；將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)入制備好的大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，PCR鑒定陽性重組子，送測序驗證，對測序結(jié)果比對正確的克隆進(jìn)行質(zhì)粒抽提，用于下游病毒包裝。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于，所述步驟2）包括：采用三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染完成后的48-72h進(jìn)行病毒收獲，采用濃縮純化方式得到高滴度的慢病毒保存液，最后根據(jù)嚴(yán)格的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測定慢病毒的各項指標(biāo)。

6.根據(jù)權(quán)利要求2至5任一項所述的用途，其特征在于，所述裝置為試劑盒。

7.一種干擾黑色素瘤細(xì)胞BTF3的方法，包括以下步驟：

1）shRNA靶點設(shè)計，目的基因BTF3 RNAi慢病毒構(gòu)建；

2）目的基因RNAi慢病毒包裝，得到慢病毒；

3）用慢病毒感染黑色素瘤細(xì)胞。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的干擾黑色素瘤細(xì)胞中BTF3的方法，其特征在于，所述步驟1）包括：在完成RNA干擾靶點設(shè)計后，合成含干擾序列的單鏈DNA oligo，退火配對產(chǎn)生雙鏈DNA；隨后通過其兩端酶切位點直接連入酶切后的慢病毒載體；將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)入制備好的大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，PCR鑒定陽性重組子，送測序驗證，對測序結(jié)果比對正確的克隆進(jìn)行質(zhì)粒抽提，用于下游病毒包裝。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的干擾黑色素瘤細(xì)胞中BTF3的方法，其特征在于，所述步驟2）包括：采用三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染完成后的48-72h進(jìn)行病毒收獲，采用濃縮純化方式得到高滴度的慢病毒保存液，最后根據(jù)嚴(yán)格的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測定慢病毒的各項指標(biāo)。

10.一種通過干擾BTF3研究黑色素瘤細(xì)胞的方法，其特征在于，在權(quán)利要求7至9任一項所述的基礎(chǔ)上，還包括步驟：

4）通過qPCR檢測mRNA水平目的基因敲減效率。