[發明專利]一種重組溶瘤病毒及其應用

在審

• 申請號: 201710499827.5
• 申請日: 2017-06-27
• 公開（公告）號: CN107164338A
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發明（設計）人: 于峰
• 申請（專利權）人: 鎮江市衛克生物科技有限公司
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/62;C07K19/00;A61K35/76;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于生物技術和基因治療領域，具體涉及一種重組溶瘤病毒及其應用。

背景技術

癌癥嚴重威脅著人類健康和生命。常規治療方案是手術和放、化療，但大多數癌癥患者確診時已錯過最佳治療時期，不宜手術。放、化療毒副反應明顯且不敏感，靶向免疫治療的“活藥”逐漸成為癌癥治療策略之一。溶瘤病毒（Oncolytic Virus，OV）是一類經過基因改造后選擇性在腫瘤細胞內復制增殖，裂解腫瘤細胞后子代病毒又能擴散到臨近腫瘤細胞的病毒，逐漸成為腫瘤靶向免疫治療的“活藥”之一。目前已經有十余種溶瘤病毒，例如牛痘病毒(VV)、腺病毒(Ad)和皰疹病(HSV)等。痘病毒因其良好的安全性而被廣泛應用于臨床，例如作為疫苗消滅天花。雖然溶瘤痘病毒（OVV）具有很強的安全性，臨床研究中也取得了一定的療效，但是OVV的抗腫瘤效果仍不夠理想，需要對其改造增強其抗癌效果。

T淋巴細胞是免疫系統中主要的抗腫瘤免疫效應細胞，在清除腫瘤細胞中發揮著及其重要的作用。T細胞發揮抗腫瘤效應需具備2個前提條件：其一是抗原遞呈細胞（APC）細胞通過捕獲的腫瘤抗原活化Navie（幼稚）T細胞，使其成為具有殺傷作用的CTL細胞。其二是腫瘤細胞將腫瘤相關抗原（TAA）肽與MHC I分子結合遞呈到腫瘤細胞表面供CTL細胞識別，即MHC限制性。缺少這兩個前提，腫瘤浸潤性T細胞（TIL）無法發揮抗腫瘤作用。腫瘤細胞往往通過下調MHC分子以逃避T細胞殺傷作用，達到免疫逃逸目的，從而使腫瘤組織浸潤的T細胞無法發揮殺傷作用。

腫瘤抗原結合超抗原（Tumor antigen binding super-antigen, TABS）是由腫瘤抗原特異性抗體（例如單鏈抗體scFv）、街頭蛋白（Linker）、超抗原（super-antigen）組成的融合蛋白。scFv包括靶向腫瘤相關抗原EphA2, HER2, GD2, Glypican-3, 5T4, 8H9, ανβ 6 整合素, B7-H3, B7-H6, CAIX, CA9, CD19, CD20, CD22, kappa light chain, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD70, CD123, CD138, CD171, CEA, CSPG4, EGFR, EGFRvIII, EGP2，EGP40, EPCAM, ERBB3, ERBB4, ErbB3/4, FAP, FAR, FBP, fetal AchR, Folate Receptor a, GD2, GD3, HLA-AI MAGE Al,HLA-A2, ILl lRa, IL13Ra2, KDR, Lambda, Lewis-Y, MCSP, 間皮素, Mucl, Mucl6, NCAM, NKG2D ligands, NY-ESO-1,PRAME, PSCA, PSC1, PSMA, ROR1, SURVIVIN, TAG72, TEM1, TEM8, VEGRR2, DR5,癌胚胎抗原, HMW-MAA,VEGF受體, 和其他一些存在于腫瘤細胞外基質中的典型的抗原比如纖連蛋白的癌胚胎變體，細胞粘合素和腫瘤壞死區，以及T細胞免疫檢查點蛋白PD-L1，CTLA-4。

攜帶TBAS的OVV能夠在腫瘤局部大量表達TABS融合蛋白，其一端的scFv特異性結合腫瘤細胞表面的TAA或TSA，另一端的超抗原分子（Sag）連接T細胞表面的TCR分子，在腫瘤細胞和T細胞之間起“橋梁”作用，Sag與TCR結合之后使T細胞活化，產生顆粒酶和穿孔素等細胞毒性物質，介導T細胞靶向殺傷腫瘤，且該殺傷作用不依賴MHC分子。因此可以克服腫瘤細胞通過下調MHC分子形成的免疫逃逸。

發明內容

目前，溶瘤病毒抗癌作用和機體自身免疫T細胞抗癌作用不能直接有效的聯合是溶瘤病毒抗癌效果不佳的主要原因之一，本發明的主要目的是將溶瘤病毒溶瘤作用和T細胞抗腫瘤效應聯合起來產生高效的抗癌效果。

為了解決上述問題，本發明提供了一種新型重組溶瘤痘病毒（OVV-TABS）所述重組溶瘤病毒為攜帶TABS融合蛋白基因的溶瘤病毒，

所述TABS融合蛋白一端能夠特異性結合腫瘤抗原，另一端能夠特異性結合T細胞表面TCR分子，該單鏈融合蛋白其從氨基端到羧基末端包含：

（a）特異性識別腫瘤性相關抗原（TAA）或腫瘤特異性抗原（TSA）的單鏈抗體（scFv）；

（b）接頭多肽；

（c）特異性結合TCR復合物或組分的超抗原；

所述TABS融合蛋白基因前面的病毒啟動子為F17R。