[發明專利]一種等離子體誘變鼠李糖脂乳化瀝青的制備方法

在審

• 申請號: 201710499577.5
• 申請日: 2017-06-27
• 公開（公告）號: CN107189460A
• 公開（公告）日: 2017-09-22
• 發明（設計）人: 章云;張貝尼
• 申請（專利權）人: 安徽省中日農業環保科技有限公司
• 主分類號: C08L95/00
• 分類號: C08L95/00;C08K5/1545;C12N15/01;C12N13/00;C12P19/44;C12R1/385
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所11308
• 代理人: 范奇

1.一種等離子體誘變鼠李糖脂乳化瀝青的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一：銅綠假單胞菌接種于斜面培養基上，置于培養箱中，培養溫度37℃，培養24h；

步驟二：將斜面培養基上的菌落接到種子培養基，37℃、搖床轉速200r·min^-1，培養24h；

步驟三：利用接種針將種子培養基上的菌落輕刮進裝有50L生理鹽水的容器中，置于搖床中震蕩30min后，用塞有無菌脫脂棉的漏斗過濾，吸取10mL濾液于無菌培養皿中，采用常壓室溫等離子體誘變處理2min，然后利用生理鹽水稀釋至8％(v/v)，將稀釋液均勻涂布于平板培養基上，37℃下，平板培養4d；

步驟四：挑取平板培養基上的菌落置于發酵培養基中，并于37℃、250rpm的搖床中培養4天后，得發酵液；

步驟五：取發酵液，在25℃、10000rpm的條件下離心處理3min，用移液槍吸取上清液到容器中，再加入5倍體積的乙酸萃取，用旋渦振蕩器混勻，靜置24h后，將上層有機相抽提到容器中，并將其放入通風廚中待乙醚揮發完全，得鼠李糖脂；

步驟六：稱取2g瀝青、2ml鼠李糖脂加入容器中，并用滴管將100ml水緩慢滴加置容器中，并用攪拌機以600r/min的速度不停攪拌，混合均勻。

2.根據權利要求1所述的一種等離子體誘變鼠李糖脂乳化瀝青的制備方法，其特征在于：步驟六中所述的滴加水的速度控制在10mL/min。

3.根據權利要求1所述的一種等離子體誘變鼠李糖脂乳化瀝青的制備方法，其特征在于：步驟一中所述的斜面培養基為牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基，包含：牛肉膏3g/L、蛋白胨10g/L、氯化鈉5g/L、瓊脂20g/L。

4.根據權利要求1所述的一種等離子體誘變鼠李糖脂乳化瀝青的制備方法，其特征在于：步驟四中所述的發酵培養基包含：K₂HPO₄ 4g/L、KH₂PO₄ 4g/L、KCL1g/L、NaNO₃ 2.5g/L、NaCL1g/L、CaCl₂·2H₂O 0.1g/L，MgSO₄ 0.2g/L，酵母粉1g/L，甘油30v/v。

5.根據權利要求1所述的一種等離子體誘變鼠李糖脂乳化瀝青的制備方法，其特征在于：步驟三中所述的平板培養基包含：葡萄糖20g/L、硝酸銨2.5g/L、酵母膏0.05g/L、磷酸二氫鉀10g/L、磷酸氫二鈉4g/L、瓊脂20g/L。

6.根據權利要求1所述的一種等離子體誘變鼠李糖脂乳化瀝青的制備方法，其特征在于：步驟二中所述的種子培養基包含：NaClg/L，胰蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L。