[發(fā)明專利]一種大花胡麻草組織培養(yǎng)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710499456.0
• 申請日: 2017-06-27
• 公開（公告）號: CN107047320B
• 公開（公告）日: 2019-03-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳敏敏;葉正文;張學(xué)英;張建軍;張永春;殷麗青;楊柳燕
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 上海碩力知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31251
• 代理人: 郭桂峰

1.一種大花胡麻草組織培養(yǎng)方法，該方法包括：(1)外植體選擇和預(yù)處理；(2)種子萌發(fā)培養(yǎng)；(3)實(shí)生苗分化增殖培養(yǎng)；(4)分割苗誘導(dǎo)生根培養(yǎng)；(5)煉苗與移栽；其特征在于：

所述外植體選擇和預(yù)處理步驟中，選擇野外收集的大花胡麻草種子作為外植體，然后對種子進(jìn)行預(yù)處理；

所述種子萌發(fā)培養(yǎng)步驟中，將經(jīng)過處理的大花胡麻草種子接種于種子萌發(fā)培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)2-3周后獲得無菌實(shí)生苗；

所述實(shí)生苗分化增殖培養(yǎng)步驟中，選擇1-2cm高的無菌實(shí)生苗在超凈工作臺(tái)上接種于增殖培養(yǎng)基進(jìn)行繼代培養(yǎng)，培養(yǎng)3-4周后獲得組培叢芽；

所述分割苗誘導(dǎo)生根培養(yǎng)步驟中，將獲得的4-6cm長苗的組培叢芽進(jìn)行分割處理，將分割苗接種于生根培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)生根培養(yǎng)，獲得組培苗；

所述煉苗與移栽步驟中，當(dāng)根長達(dá)到2-5cm時(shí)，進(jìn)行煉苗3-5天，后取出組培苗，進(jìn)行移栽；

所述實(shí)生苗分化增殖培養(yǎng)步驟中，所述增殖培養(yǎng)基為在WPM培養(yǎng)基中添加6-芐氨基腺嘌呤0.4-0.6mg/L、萘乙酸0.04-0.06mg/L、蔗糖20-30g/L以及瓊脂粉6-7g/L，并調(diào)節(jié)PH至5.5-6.0所得的培養(yǎng)基；所述培養(yǎng)基置于透明玻璃培養(yǎng)瓶中并給予光照12-14h/天，其中，光照強(qiáng)度為1500-2000LX，溫度為25℃±2℃；

所述的種子萌發(fā)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基中分別含有活性炭0.5-0.8g/L。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大花胡麻草組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述外植體選擇和預(yù)處理步驟中：在收集的大花胡麻草種子中，挑選種莢未開裂的種子作為外植體，然后進(jìn)行預(yù)處理；

所述預(yù)處理包括前處理與消毒滅菌處理步驟；

其中，所述前處理步驟為：先用75wt％酒精擦拭種莢表面，將種子破殼取出后置于滅菌的1.5mL的離心管中，加入1mL無菌水浸泡1-2h，待種子吸足水分后，在1000rpm的條件下離心3-5min，倒掉上清液，準(zhǔn)備下一步消毒；

所述消毒滅菌處理步驟為：將前處理后的種子置于超凈工作臺(tái)中，用75％的酒精消毒30-60秒，再用體積濃度為0.1％的升汞浸泡8-10min，后使用無菌水沖洗6-8次。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大花胡麻草組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述種子萌發(fā)培養(yǎng)步驟中，所述種子萌發(fā)培養(yǎng)基為在MS培養(yǎng)基中添加蔗糖20-30g/L、瓊脂粉6-7g/L，并調(diào)節(jié)PH至5.5-6.0所得的培養(yǎng)基；所述培養(yǎng)基置于透明玻璃培養(yǎng)瓶中并給予光照10-12h/天，其中，光照強(qiáng)度為1500-2000LX，溫度為25℃±2℃，在此條件下培養(yǎng)2-3周誘導(dǎo)種子萌發(fā)出苗。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種大花胡麻草組織培養(yǎng)方法，其特征在于：所述的種子萌發(fā)培養(yǎng)基的pH調(diào)節(jié)至5.8。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大花胡麻草組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述分割苗誘導(dǎo)生根培養(yǎng)步驟中，所述生根培養(yǎng)基為在WPM培養(yǎng)基中添加萘乙酸0.1-0.3mg/L，蔗糖20-30g/L以及瓊脂粉6-7g/L，并調(diào)節(jié)PH至5.5-6.0所得的培養(yǎng)基；所述培養(yǎng)基置于透明玻璃培養(yǎng)瓶中并給予光照12-14h/天，光照強(qiáng)度為1500-2000LX，溫度為25℃±2℃。