[發(fā)明專利]一種以聚丙烯無紡布固定琥珀酸放線桿菌發(fā)酵生產(chǎn)丁二酸的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201710499248.0 | 申請(qǐng)日： | 2017-06-27 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN107164416B | 公開（公告）日： | 2020-06-09 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 陳鵬程;鄭璞;紀(jì)凡 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 江南大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12P7/46 | 分類號(hào)： | C12P7/46;C12N11/082;C12R1/04 |
| 代理公司： | 哈爾濱市陽光惠遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211 | 代理人： | 張勇 |
| 地址： | 214122 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 聚丙烯 無紡布 固定 琥珀酸 放線 桿菌 發(fā)酵 生產(chǎn) 丁二酸 方法 | ||
1.一種發(fā)酵生產(chǎn)丁二酸的方法，其特征在于，包括以下步驟：
取克重為15g/m2的聚丙烯熔噴無紡布，121℃滅菌20min；琥珀酸放線桿菌A.succinogenes CCTCC NO:M2012036搖瓶種子在CO2氣氛中培養(yǎng)12h，培養(yǎng)溫度為38℃，按照3％的接種量在25mL種子培養(yǎng)基中接入琥珀酸放線桿菌搖瓶種子，于35℃，通CO2的厭氧條件下培養(yǎng)3h之后放入無紡布并使其浸沒在種子培養(yǎng)基中，繼續(xù)吸附培養(yǎng)3h；種子培養(yǎng)基含葡萄糖8—12g/L，酵母膏10—14g/L，K2HPO4 15—17g/L，NaH2PO4 5—7g/L，pH自然，115℃滅菌20min；
琥珀酸放線桿菌吸附培養(yǎng)后，將固定有琥珀酸放線桿菌的無紡布投入裝有新鮮發(fā)酵培養(yǎng)基的搖瓶中，發(fā)酵液體積與無紡布表面之比為1.0cm3/cm2，發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖20g/L，玉米漿20—30g/L，K2HPO4 2—2.8g/L，NaH2PO4 2.0—3.5g/L，谷氨酸鈉1—2g/L，蛋氨酸0.09—0.2g/L，Na2S 0.08—1.5g/L，pH調(diào)至6.0，115℃滅菌30min，通入CO2維持厭氧環(huán)境，控制發(fā)酵溫度35℃，用碳酸鎂固體控制pH5.8—7.2。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種發(fā)酵生產(chǎn)丁二酸的方法，其特征在于，將琥珀酸放線桿菌固定于聚丙烯無紡布載體上，通過反復(fù)分批、反復(fù)補(bǔ)料分批的方式進(jìn)行發(fā)酵。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種發(fā)酵生產(chǎn)丁二酸的方法，其特征在于，所述聚丙烯無紡布的纖維直徑在微米級(jí)別，聚丙烯無紡布的纖維外徑為2.5—10.8μm、微孔孔徑約0.05—1.9μm、孔隙率約30—80％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種發(fā)酵生產(chǎn)丁二酸的方法，其特征在于，聚丙烯無紡布通過鐵絲網(wǎng)進(jìn)行定型。
5.根據(jù)權(quán)利要求1 或 2 所述的一種發(fā)酵生產(chǎn)丁二酸的方法，其特征在于，反復(fù)分批發(fā)酵時(shí)，將固定有琥珀酸放線桿菌的聚丙烯無紡布投入發(fā)酵培養(yǎng)基，維持厭氧環(huán)境，控制發(fā)酵溫度35℃，控制pH5.8—7.2進(jìn)行發(fā)酵；發(fā)酵培養(yǎng)基的葡萄糖濃度為20g/L，發(fā)酵時(shí)間4—30h，當(dāng)發(fā)酵液中葡萄糖濃度低于3g/L時(shí)，放料并更換新鮮發(fā)酵培養(yǎng)基，重復(fù)進(jìn)行下一批次發(fā)酵，反復(fù)發(fā)酵批次5—18次，總運(yùn)行時(shí)間40—200h。
6.根據(jù)權(quán)利要求1 或 2 所述的一種發(fā)酵生產(chǎn)丁二酸的方法，其特征在于，反復(fù)補(bǔ)料分批發(fā)酵時(shí)，將固定有琥珀酸放線桿菌的聚丙烯無紡布投入發(fā)酵培養(yǎng)基，維持厭氧環(huán)境，控制發(fā)酵溫度35℃，控制pH5.8—7.2進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵培養(yǎng)基的葡萄糖濃度為20g/L，發(fā)酵時(shí)間8—15h，當(dāng)發(fā)酵液中葡萄糖濃度低于10g/L時(shí)，一次性補(bǔ)加100g/L的葡萄糖，至反應(yīng)器中葡萄糖濃度為20—50g/L，當(dāng)發(fā)酵液中葡萄糖濃度低于5g/L時(shí)，重復(fù)補(bǔ)料過程，可補(bǔ)1次或者多次料，當(dāng)發(fā)酵液中葡萄糖濃度再次低于5g/L時(shí)，放料并更換新鮮培養(yǎng)基；重復(fù)上述過程，進(jìn)行下一批次發(fā)酵，總運(yùn)行時(shí)間50—180h，期間保持無菌操作，并維持發(fā)酵罐中的厭氧環(huán)境。
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