[發(fā)明專利]一種高分泌納豆激酶的枯草芽孢桿菌及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710498622.5
• 申請(qǐng)日: 2017-06-27
• 公開（公告）號(hào): CN107099487B
• 公開（公告）日: 2020-07-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郝寧;郭格格;許琳;歐陽平凱
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京工業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N9/54;C12R1/125
• 代理公司: 南京新慧恒誠知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32424
• 代理人: 王月霞

本發(fā)明公開了一種高分泌納豆激酶枯草芽孢桿菌及其應(yīng)用，所述菌株的分類命名為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)gs?11061，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，其保藏編號(hào)是CGMCC No.13932。本發(fā)明還公開了利用上述高產(chǎn)納豆激酶的枯草芽孢桿菌生產(chǎn)納豆激酶的方法。本發(fā)明方法與其他發(fā)酵方法相比，在發(fā)酵方面，該菌可以在高溫條件下發(fā)酵，同時(shí)明顯地縮短發(fā)酵周期；在培養(yǎng)基成分方面，利用木糖母液粗原料降低成本，能耗低，污染小；與原始菌相比，納豆激酶的分泌量明顯提高，且發(fā)酵產(chǎn)物易處理，副產(chǎn)物少。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種高分泌納豆激酶的枯草芽孢桿菌。

背景技術(shù)

納豆芽孢桿菌(Bacillus natto)是從日本傳統(tǒng)食品中分離出來的菌種,其原始菌株與枯草芽孢桿菌相同,是枯草芽孢桿菌的一個(gè)亞種。納豆芽孢桿菌不僅具有分解蛋白質(zhì)、碳水化合物、脂肪等大分子物質(zhì)的性能,使發(fā)酵產(chǎn)品中富含氨基酸、有機(jī)酸、寡聚糖等多種易被人體吸收的成分,而且在發(fā)酵過程中在發(fā)現(xiàn)了一些生理活性物質(zhì)而使納豆具有多種保健功能,如抗腫瘤、降血壓、抗菌等作用,還可預(yù)防骨質(zhì)疏松、提高蛋白質(zhì)的消化率、抗氧化等。最主要的是，納豆菌能產(chǎn)生具有溶栓活性的納豆激酶,而且在酸性胃環(huán)境中能保持高度的穩(wěn)定性。因此，對(duì)于納豆芽孢桿菌的研究市場(chǎng)前景仍非常廣闊。

納豆激酶具有很強(qiáng)的溶解血栓功能,與目前臨床所用的尿激酶、鏈激酶等溶栓藥物相比，具有安全性好，易被人體吸收，作用直接迅速，藥效持續(xù)時(shí)間長，可由納豆枯草芽抱桿菌直接發(fā)酵生產(chǎn)因而造價(jià)低廉等優(yōu)點(diǎn)。因此，納豆激酶是一種很有潛力的新型溶栓藥物。納豆激酶的發(fā)酵工藝一般分為兩種，分別為固態(tài)發(fā)酵和液態(tài)發(fā)酵。相比較于固態(tài)發(fā)酵易染菌、難散熱、回收率低、氣味難以接受、很難滿足嚴(yán)格藥品特別是生物制劑的生產(chǎn)要求等問題。液體發(fā)酵具有成本低廉、純度高、環(huán)境污染小等優(yōu)點(diǎn)，因此，本實(shí)驗(yàn)室仍采用傳統(tǒng)的液體發(fā)酵的方式，但在發(fā)酵過程中，優(yōu)化培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件，極大地節(jié)約了成本，并且提高了納豆激酶的生產(chǎn)效率和酶活。目前用于產(chǎn)納豆激酶的菌株有保加利亞乳桿菌（Lactobacillus bulgaricus）、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、鏈霉菌（Streptomyces）、乳酸菌(lactic acid bacteria）、大腸桿菌（Escherichia coli）、巴斯德畢赤酵母（Pichia pastoris）等。在液體發(fā)酵產(chǎn)納豆激酶中，其副產(chǎn)物中含有部分的嘌呤的產(chǎn)生。目前，專利201110099838.7《一種產(chǎn)納豆激酶枯草芽孢桿菌及該菌種發(fā)酵生產(chǎn)納豆激酶的方法》中記載，獲得的納豆激酶酶活最高達(dá)到5670FU/g。通常情況下，納豆激酶液態(tài)發(fā)酵的時(shí)間為72 h左右。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種高分泌納豆激酶枯草芽孢桿菌及其應(yīng)用。該枯草芽孢桿菌的納豆激酶活性高,且可有效利用木糖母液等物質(zhì)發(fā)酵生產(chǎn)納豆激酶，降低生產(chǎn)成本且安全環(huán)保。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種高分泌納豆激酶枯草芽孢桿菌，所述菌株的分類命名為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) gs-11061，已于2017年3月27日保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國科學(xué)院微生物研究所，保藏號(hào)為CGMCCNO.13932。

所述菌株是通過如下方法篩選得到的：從市面上買來的納豆產(chǎn)品中分離得到五株枯草芽孢桿菌，利用液態(tài)LB培養(yǎng)基進(jìn)行基礎(chǔ)培養(yǎng)，35℃培養(yǎng)1天之后，同時(shí)測(cè)定生物量和納豆激酶的分泌量，得到一株活力最為旺盛的菌株，命名為best-1，作為優(yōu)勢(shì)菌株。