[發明專利]檢測遠志中tenuifoliside C含量的方法

有效

• 申請號: 201710497277.3
• 申請日: 2017-06-26
• 公開（公告）號: CN107151705B
• 公開（公告）日: 2020-09-29
• 發明（設計）人: 張福生;王丹丹;閆艷;張建琴;秦雪梅;張麗增
• 申請（專利權）人: 山西大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 山西五維專利事務所(有限公司) 14105
• 代理人: 張福增

本發明公開一種檢測遠志藥材中tenuifoliside C含量的PCR引物及方法，該PCR引物為：上游引物：5’?ATGCCTATGCTTGTGCC?3’；下游引物：5’?TAGTGGGTGTTGCGTCT?3’。該方法包括：提取遠志樣品的基因組DNA；以基因組DNA為模板，利用該特異性引物進行PCR擴增；通過PCR擴增產物檢測其所含化合物tenuifoliside C的含量，能擴增出長度為654bp條帶的遠志樣品，其所含化合物tenuifoliside C的含量較低。本發明所述PCR引物及方法，具有方便快捷、準確性高的優點，可在遠志藥材的良種選育中應用，可大大縮短育種時間，提高育種效率。

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，尤其涉及一種檢測遠志藥材中化合物tenuifoliside C含量的PCR引物及方法。

背景技術

遠志(Polygala tenuifolia Willd.)始載于《神農本草經》，列為上品，且為常用中藥。性溫，味苦、辛，具有安神益智、祛痰消腫等功效。經現代研究發現，遠志藥材的主要有效成分包括皂苷類、糖酯類、口山酮類及生物堿類等，具有抑菌、抗炎、提高認知、改善記憶能力、抗老年癡呆、抗抑郁、抗腫瘤、抗衰老等藥理作用。

中藥材藥效的強弱與藥材質量的優劣密切相關，而藥材質量的優劣與藥材中所含主要化學成分含量的高低緊密相關。中藥材中次生代謝物的累積程度及含量變化又受生長年限的影響，中藥材尤其是根莖類中藥材，生長年限較長，一般以2-3年生為主，測定中藥材中所含化合物的含量，需要很長時間。

目前中藥材中化合物的定性及定量分析通常采用以下幾個途徑：(1)購買相關標準品，與樣品中的組分進行對比，這一途經的缺點是成本很高而且不一定能找到所有相關的標準物；(2)采用各種分離制備手段對組分進行分離純化，缺點是具有極大的盲目性，耗時長，同時還不可避免的涉及到大量的重復性工作；(3)通過查文獻來尋找相關化合物，但過去的文獻報道采用的數據往往采自低分辨率儀器，存在不少假陽性結果。

化合物含量是多基因控制的復雜性狀，不同遠志樣品間化合物含量差異較大。研究表明，遠志糖酯類化合物具有抗癡呆和腦保護活性，本發明選取遠志中含量相對較高且具有鎮靜安神作用的tenuifoliside C作為研究對象，篩選出與tenuifoliside C含量相關的特異性DNA分子條帶，目的是針對該特異性條帶設計出可檢測tenuifoliside C含量的特異性PCR引物，并希望得到實際應用。

發明內容

本發明的目的在于提供一種檢測遠志藥材中tenuifoliside C含量的PCR引物；以及利用該PCR引物檢測遠志藥材中tenuifoliside C含量的方法。該方法不僅可用于遠志藥材中tenuifoliside C含量的檢測，而且具有方便快捷、準確性好的優點，可在遠志藥材的良種選育中應用，可大大縮短育種時間，提高育種效率。

本發明提供的一種檢測遠志藥材中tenuifoliside C含量的PCR引物，該特異性PCR引物如下所示：

上游引物：5’-ATGCCTATGCTTGTGCC-3’(SEQ ID No.1)；

下游引物：5’-TAGTGGGTGTTGCGTCT-3’(SEQ ID No.2)。

本發明提供的一種檢測遠志藥材中tenuifoliside C含量的方法，包括如下步驟：

(1)提取遠志樣品的基因組DNA；

具體為采用CTAB法提取基因組DNA；由于各個發育時期的個體、各個組織器官甚至細胞的DNA保持一致，不受環境的影響且遺傳穩定，故可選取任意生長時期、任意組織部位的遠志樣品提取DNA。

(2)以所述基因組DNA為模板，利用所述的PCR引物進行PCR擴增；