[發(fā)明專利]一種運(yùn)動障礙動物的建立方法及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710495086.3
• 申請日: 2017-06-26
• 公開（公告）號: CN109112125B
• 公開（公告）日: 2022-02-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 熊志奇;李奎;吳明月;譚國鶴;陳任超;陳蕾
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院腦科學(xué)與智能技術(shù)卓越創(chuàng)新中心
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/90;A01K67/027;A61K49/00
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

1.用于制備運(yùn)動障礙動物的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包括：

(1)使動物基因組中Prrt2基因降低表達(dá)或失活的試劑；所述的動物是嚙齒類動物；

(2)用于對動物腦部進(jìn)行藍(lán)光激光刺激的試劑或裝置；或用于對動物腦部進(jìn)行腦損傷的裝置。

2.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，(2)中，所述的用于對動物腦部進(jìn)行藍(lán)光激光刺激的試劑或裝置包括：表達(dá)光控陽離子通道基因的表達(dá)構(gòu)建體，光纖插芯，藍(lán)光激光器，腦立體定位儀和/或微量注射泵。

3.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，(2)中，用于對動物腦部進(jìn)行腦損傷的裝置包括：

細(xì)棒狀器械；或

手術(shù)導(dǎo)管以及與該導(dǎo)管相配套的導(dǎo)管內(nèi)芯。

4.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的細(xì)棒狀器械為：針頭，塑料棒或玻璃棒。

5.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，(1)中，所述的使動物基因組中Prrt2基因降低表達(dá)或失活的試劑選自：

通過基因剔除實現(xiàn)Prrt2基因降低表達(dá)或失活的試劑；或

通過插入外源基因或基因片段實現(xiàn)Prrt2基因降低表達(dá)或失活的試劑。

6.如權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，使動物基因組中Prrt2基因降低表達(dá)或失活的試劑是cas9基因編輯試劑。

7.如權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述的動物是小鼠，所述的cas9基因編輯試劑在Prrt2基因的編碼序列的C666之后敲入終止密碼子。

8.如權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述的基因編輯試劑包括：

針對小鼠Prrt2的sgRNA，其序列如SEQ ID NO:2所示；

供體質(zhì)粒，其包含如SEQ ID NO:3所示的序列。

9.如權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述的基因編輯試劑還包括：在細(xì)胞內(nèi)形成Cas9 mRNA的試劑。

10.如權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，使動物基因組中Prrt2基因降低表達(dá)或失活的試劑是TALEN靶向基因敲除試劑。

11.如權(quán)利要求10所述的試劑盒，其特征在于，所述的動物是大鼠，所述的TALEN靶向基因敲除試劑在Prrt2基因的翻譯起始密碼子ATG后刪除10bp堿基序列。

12.如權(quán)利要求11所述的試劑盒，其特征在于，所述的TALEN靶向基因敲除試劑的靶向序列如SEQ ID NO:4。

13.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的光纖插芯直徑為0.2±0.1mm，藍(lán)光激光器是BL473T3-050。

14.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的動物是鼠。

15.一種制備運(yùn)動障礙動物的方法，其特征在于，所述方法包括：

(a)使動物基因組中Prrt2基因降低表達(dá)或失活；所述的動物是嚙齒類動物；

(b)對(a)獲得的動物，進(jìn)行激光藍(lán)光刺激或腦損傷，從而獲得運(yùn)動障礙動物。

16.如權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于，步驟(b)中，進(jìn)行激光藍(lán)光刺激包括：在動物的小腦或鄰近的神經(jīng)元組織中置入光纖插芯；利用藍(lán)光激光器刺激2～20次。

17.權(quán)利要求16所述的方法，其特征在于，用藍(lán)光激光器刺激6～15秒/次，間隔6～15進(jìn)行第2次刺激。