[發明專利]基于碳量子點和金納米顆粒的熒光共振能量轉移檢測氧化損傷DNA的方法

有效

• 申請號: 201710493253.0
• 申請日: 2017-06-26
• 公開（公告）號: CN107287297B
• 公開（公告）日: 2021-04-06
• 發明（設計）人: 葉偉偉;陳畑;毛燚杰;孫培龍
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12Q1/6804
• 分類號: C12Q1/6804
• 代理公司: 杭州斯可睿專利事務所有限公司 33241
• 代理人: 王利強

一種基于碳量子點和金納米顆粒的熒光共振能量轉移檢測氧化損傷DNA的方法，包括以下步驟：(1)CQDs表面生物功能化處理：在表面氨基化的CQDs溶液中加入戊二醛，靜置10～40min后，加入氧化損傷DNA，4℃下保存備用；(2)AuNPs制備和表面生物功能化處理：利用檸檬酸鈉還原高氯金酸的方法制備AuNPs，8?OHdG抗體通過抗體上的氨基端連接到制備得到的AuNPs表面，AuNPs和8?OHdG抗體的物質的量比為1:10～1:50；(3)氧化損傷DNA的測定：將8?OHdG抗體修飾的AuNPs溶液加入到氧化損傷DNA修飾的CQDs溶液中，孵育0.5～2小時后進行熒光強度測定。本發明快速、簡便、靈敏。

技術領域

本發明涉及一種氧化損傷DNA的檢測技術方法，尤其涉及一種基于碳量子點和金納米顆粒的熒光共振能量轉移檢測氧化損傷DNA的方法。

背景技術

環境雌激素具有類似生物體內激素性質，能干擾人體內分泌系統的正常生理功能。常見的環境雌激素有雙酚A、鄰苯二甲酸酯類塑化劑以及與雌二醇結構相似的類固醇衍生物合成雌激素等。這些環境污染物具有高親脂性或脂溶性，易通過食物鏈進入人體，富集于動物和人體中。環境雌激素在人體內代謝，產生活性氧自由基如羥自由基、超氧陰離子等，攻擊DNA分子中的鳥嘌呤堿基第8位碳原子，生成氧化性加合物8-羥基脫氧鳥苷，導致DNA氧化損傷，進而誘發基因突變和細胞癌變。

目前，常用的DNA氧化損傷檢測主要有高效液相色譜結合電化學檢測，氣質聯用分析法，這些方法操作成本相對較高，且假陽性高。伴隨著免疫學技術的快速發展，8-羥基脫氧鳥苷多克隆抗體的發展和單克隆抗體的使用為酶聯免疫吸附測定(enzyme linkedimmunosorbent assay，ELISA)的發展提供了條件。ELISA雖然特異性強、靈敏度高，但存在交叉反應，可能導致檢測值比真實值偏高。

近年來，生物傳感器趨向于微型化、集成化、智能化方向發展，在早期快速疾病診斷治療方面展示出了廣闊的應用前景。熒光共振能量轉移(fluorescence resonanceenergy transfer,FRET)生物傳感器是熒光生物傳感器的一種類型，在一個熒光基團(供體)的激發狀態下由一對偶極子介導的能量從供體向另一個熒光基團(受體)轉移的過程，可廣泛應用于生物化學領域分子檢測、快速抗原檢測、癌癥標記物檢測等。FRET傳感器系統中需要兩個不同的熒光基團，傳統的有機熒光基團價格昂貴，且熒光不穩定，容易發生不可逆的光漂白，不適合可靠長期檢測。這就要求我們發展新型的低成本穩定的FRET熒光傳感體系用于環境雌激素代謝引起DNA損傷和修復分析研究。

發明內容

為了克服已有檢測損傷DNA的方法的速度較慢、工序復雜、靈敏度較差等不足，本發明提供了一種快速、簡便、靈敏的基于碳量子點和金納米顆粒的熒光共振能量轉移檢測氧化損傷DNA的方法。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種基于碳量子點和金納米顆粒的熒光共振能量轉移檢測氧化損傷DNA的方法，所述方法包括以下步驟：

(1)CQDs表面生物功能化處理：在表面氨基化的CQDs溶液中加入戊二醛，所述CQDs溶液和戊二醛的體積比為：(100～300)：(1～6)；靜置10～40min后，加入氧化損傷DNA，4℃下保存備用；

(2)AuNPs制備和表面生物功能化處理：利用檸檬酸鈉還原高氯金酸的方法制備AuNPs，8-OHdG抗體通過抗體上的氨基端連接到制備得到的AuNPs表面，AuNPs和8-OHdG抗體的物質的量比為1:10～1:50；

(3)氧化損傷DNA的測定：將8-OHdG抗體修飾的AuNPs溶液加入到氧化損傷DNA修飾的CQDs溶液中，孵育0.5～2小時后進行熒光強度測定。

進一步，所述步驟(1)中，CQDs的濃度為25μg/mL,戊二醛的質量分數為50％，氧化損傷后帶有8-OHdG的DNA的濃度范圍為0pM～30μM。