[發明專利]脂蛋白復合物及其制備和用途

有效

• 申請號: 201710493059.2
• 申請日: 2012-02-06
• 公開（公告）號: CN107337728B
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發明（設計）人: J-L.達塞尤克斯;D.C.奧尼西奧;R.阿克曼
• 申請（專利權）人: 塞勒尼斯醫療控股公司
• 主分類號: C07K14/775
• 分類號: C07K14/775;A61K38/17;A61K47/62;A61P3/00;A61P3/06;C12N5/10
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 易方方

1.脂蛋白復合物的群體，其各自包含脂質部分和載脂蛋白部分，所述載脂蛋白部分包含載脂蛋白A-I?(“ApoA-I”)，其中根據經凝膠滲透色譜法的單峰所反映，所述脂蛋白復合物為至少95%均質的，其中所述脂蛋白復合物的群體通過以下方法產生，所述方法包括：

(a)將包含脂質成分和蛋白成分的起始混懸液從第一溫度范圍內的溫度冷卻至第二溫度范圍內的溫度，其中：

(i)所述起始混懸液中的脂質:蛋白摩爾比為2:1至200:1；

(ii)所述起始混懸液中的脂質包含重量：重量比為99:1至95:5的中性磷脂和帶負電荷的磷脂；

(iii)其中所述中性磷脂和帶負電荷的磷脂的酰基鏈的長度為14-20個碳；和

(iv)所述第一溫度范圍包括不低于所述蛋白成分的相轉變溫度5℃至不高于所述蛋白成分的相轉變溫度5℃的溫度，并且所述第二溫度范圍包括不低于所述脂質成分的相轉變溫度5℃至不高于所述脂質成分的相轉變溫度5℃的溫度；

(b)將所述(a)的經冷卻的混懸液從所述第二溫度范圍內的溫度加熱至所述第一溫度范圍內的溫度；

(c)將所述(b)的經加熱的混懸液從所述第一溫度范圍內的溫度冷卻至所述第二溫度范圍內的溫度；和

(d)重復步驟(b)和(c)，直至獲得至少95%均質的脂蛋白復合物，從而形成脂蛋白復合物。

2.權利要求1所述的群體，其中所述脂質成分包含脂質顆粒，并且所述蛋白成分包含ApoA-I或ApoA-I和脂質，所述脂質的含量為以起始混懸液中的脂質總量的重量計不超過10%。

3.權利要求1或權利要求2所述的群體，其中所述脂蛋白復合物為至少97%均質，根據經凝膠滲透色譜法的單峰所反映。

4.權利要求1至3中任一項所述的群體，其中以群體中的ApoA-I的重量計至少98%是非截短的ApoA-I。

5.?權利要求1-4中任一項所述的群體，其中根據經凝膠滲透色譜法(“GPC”)或者動態光散射(“DLS”)所測量，至少95%的所述脂蛋白復合物為具有以下粒度的顆粒的形式：4?nm至15?nm、6?nm至15?nm、4?nm至12?nm、6?nm至12?nm或者8?nm至12?nm。

6.?權利要求1-5中任一項所述的群體，其中在所述群體中至少75?wt%、至少80?wt%、至少85?wt%、至少90?wt%或者至少95?wt%的ApoA-I為成熟形式。

7.?權利要求1-5中任一項所述的群體，其中在所述群體中不超過25?wt%、不超過20wt%、不超過15?wt%、不超過10?wt%或者不超過5?wt%的ApoA-I為不成熟形式。

8.權利要求1-7中任一項所述的群體，其中在所述群體中所述ApoA-I中的不超過10%、不超過5%、不超過3%、不超過2%或者不超過1%的蛋氨酸112和蛋氨酸148各自被氧化。

9.權利要求1-8中任一項所述的群體，其中在所述群體中所述ApoA-I的不超過15%、不超過10%、不超過5%、不超過4%、不超過3%、不超過2%或者不超過1%的氨基酸被脫去酰胺。

10.?權利要求1-9中任一項所述的群體，其中所述群體含有不超過1?EU內毒素/毫克ApoA-I、不超過0.5?EU內毒素/毫克ApoA-I、不超過0.3?EU內毒素/毫克ApoA-I或者不超過0.1?EU內毒素/毫克ApoA-I。

11.權利要求1-10中任一項所述的群體，其中所述群體含有不超過100皮克宿主細胞DNA/毫克ApoA-I、不超過50皮克宿主細胞DNA/毫克ApoA-I、不超過25皮克宿主細胞DNA/毫克ApoA-I、不超過10皮克宿主細胞DNA/毫克ApoA-I或者不超過5皮克宿主細胞DNA/毫克ApoA-I。