[發明專利]一種活細胞線粒體數量染色檢測方法在審
| 申請號： | 201710491650.4 | 申請日： | 2017-06-26 |
| 公開（公告）號： | CN107290197A | 公開（公告）日： | 2017-10-24 |
| 發明（設計）人： | 沈柱 | 申請（專利權）人： | 四川省人民醫院 |
| 主分類號： | G01N1/30 | 分類號： | G01N1/30;G01N15/10;G01N15/14 |
| 代理公司： | 四川力久律師事務所51221 | 代理人： | 熊曉果 |
| 地址： | 610072 四川*** | 國省代碼： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 細胞 線粒體 數量 染色 檢測 方法 | ||
1.一種活細胞線粒體數量染色檢測方法，包括以下步驟：
（1）原液配制：噻唑藍溶于100 ml的磷酸緩沖液中，配制成濃度為0.3-1wt%的溶液，過濾以除去細菌，避光保存；
（2）接種細胞：用培養液配成單個細胞懸液，以每孔約2000-10000個細胞接種到96孔板中，每孔體積200-300μL；
（3）培養細胞：根據細胞類型設置培養條件，培養2-8天；
（4）染色：每孔加入上述噻唑藍原液20-30μL，細胞培養箱內繼續孵育3-5h；
（5）觀察：小心吸取孔內培養上清液10-50μL，加入200-300μL新鮮的培養液，并于高倍光學顯微鏡下觀察藍紫色顆粒數量。
2.如權利要求1所述活細胞線粒體數量染色檢測方法，其特征在于，步驟1，噻唑藍溶液在配制以后兩周內有效。
3.如權利要求1所述活細胞線粒體數量染色檢測方法，其特征在于，步驟1，噻唑藍溶液在配制和保存的過程中，容器注意避光。
4.如權利要求1所述活細胞線粒體數量染色檢測方法，其特征在于，步驟1，配制噻唑藍溶液的時候用0.22μm濾膜過濾除去細菌。
5.如權利要求1所述活細胞線粒體數量染色檢測方法，其特征在于，步驟1，配制好的噻唑藍溶液放置在0-8℃溫度下保存。
6.如權利要求5所述活細胞線粒體數量染色檢測方法，其特征在于，步驟1，配制好的噻唑藍溶液放置在4℃環境保存。
7.如權利要求1所述活細胞線粒體數量染色檢測方法，其特征在于，步驟1，所述磷酸鹽緩沖液pH=7.4。
8.如權利要求1所述活細胞線粒體數量染色檢測方法，其特征在于，步驟3，細胞培養時間為3-5天。
9.如權利要求1所述活細胞線粒體數量染色檢測方法，其特征在于，步驟4，細胞培養箱內繼續孵育3.5-4.5 h。
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