[發(fā)明專利]一種監(jiān)測核酸文庫復(fù)雜程度的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710491638.3
• 申請日: 2017-06-23
• 公開（公告）號(hào): CN109136347A
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅昭鋒;方曉娜;王進(jìn)軍;何磊;楊偉麗
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/686
• 分類號(hào): C12Q1/686;C12N15/10
• 代理公司: 中科專利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司 11021
• 代理人: 張國梁

1.一種確定或監(jiān)測核酸文庫復(fù)雜程度的方法，所述方法包括以下步驟：

1)以文庫中的核酸為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得擴(kuò)增曲線，

2)當(dāng)曲線達(dá)到平臺(tái)期后，將擴(kuò)增曲線對擴(kuò)增循環(huán)數(shù)求導(dǎo)，導(dǎo)數(shù)值越小，指示庫容越大。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述文庫為RNA文庫，所述方法還包括將RNA文庫反轉(zhuǎn)錄成cDNA文庫，以反轉(zhuǎn)錄成的cDNA文庫為模板PCR擴(kuò)增，獲得擴(kuò)增曲線。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中核酸模板是復(fù)雜模板，優(yōu)選的所述核酸文庫的復(fù)雜程度是變化的，例如是隨著篩選而降低的。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的方法，其中所述方法包括將不同樣品放在相同PCR條件下進(jìn)行擴(kuò)增，優(yōu)選的所述文庫的擴(kuò)增產(chǎn)物長度相同。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的方法，其中所述PCR為熒光定量PCR，優(yōu)選的所述熒光定量PCR的熒光染料包括雙鏈結(jié)合染料，例如Eva Green染料、LC Green染料、SYBR Green染料或SYT09染料。

6.一種改進(jìn)的SELEX方法，所述方法包括通過權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的方法確定或監(jiān)測核酸文庫復(fù)雜程度的步驟。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，所述方法還包括根據(jù)確定或監(jiān)測的核酸文庫的復(fù)雜程度對于每輪篩選的有效性進(jìn)行判定，對于文庫富集程度進(jìn)行判定，和/或?qū)Y選終點(diǎn)進(jìn)行判定。

8.權(quán)利要求6或7所述的方法，其中所述方法包括以篩選獲得文庫為起始文庫，重復(fù)進(jìn)行篩選的步驟，例如重復(fù)1-20輪，優(yōu)選的在文庫的庫容簡單時(shí)停止篩選。

9.一種獲得核酸適配體的方法，所述方法通過權(quán)利要求6-8任一項(xiàng)的改進(jìn)的SELEX方法進(jìn)行。

10.權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)的方法，其中所述方法用于自動(dòng)化方法中。