[發(fā)明專利]一種化學(xué)修飾UNG酶及其修飾方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710491119.7
• 申請(qǐng)日: 2017-06-23
• 公開（公告）號(hào): CN107312762B
• 公開（公告）日: 2020-08-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡振新;譚卓;郜安國(guó)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州點(diǎn)晶生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/24
• 分類號(hào): C12N9/24;C12N15/10;C12P19/34
• 代理公司: 蘇州華博知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32232
• 代理人: 何蔚

1.一種化學(xué)修飾UNG酶，其特征在于，所述化學(xué)修飾UNG酶是用酸酐修飾的UNG酶；

所述酸酐是馬來酸酐或者位于烯鍵的兩個(gè)碳原子上的R1、R2官能團(tuán)被其他官能取代物取代的馬來酸酐衍生物；

所述化學(xué)修飾UNG酶的酸酐具有以下結(jié)構(gòu)式：

其中，R1、R2可以為H、CH₃、CH₃CH₂，或F、Cl；

所述化學(xué)修飾UNG酶具有45℃-70℃的熱啟動(dòng)溫度。

2.如權(quán)利要求1所述的化學(xué)修飾UNG酶，其特征在于，所述酸酐是檸康酸酐，其R1＝H，R2＝CH₃。

3.一種化學(xué)修飾UNG酶的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

1)、UNG酶預(yù)冷：將UNG酶于冰上靜置；

2)、化學(xué)修飾：于冰上向UNG酶中加入用于修飾的酸酐，再加入NaOH并維持pH在7.5-9.0之間；

3)、修飾酶純化：將上步所得UNG酶轉(zhuǎn)移至透析袋并加入Tris-KAc溶液后封口，放入4℃的pH7.5-9.0的Tris和KAc溶液中透析；或?qū)⑸喜剿肬NG酶通過G-25分子篩純化；

4)、收集純化酶，將經(jīng)過透析或純化的酶收集，離心除去不溶沉淀，取上清分裝，即是以酸酐修飾的UNG酶；

所述酸酐是馬來酸酐或者位于烯鍵的兩個(gè)碳原子上的R1、R2官能團(tuán)被其他官能取代物取代的馬來酸酐衍生物；

所述化學(xué)修飾UNG酶的酸酐具有以下結(jié)構(gòu)式：

其中，R1、R2可以為H、CH₃、CH₃CH₂，或F、Cl。

4.一種權(quán)利要求1所述的化學(xué)修飾UNG酶的應(yīng)用，其特征在于，所述化學(xué)修飾UNG酶用于核酸常溫?cái)U(kuò)增或等溫?cái)U(kuò)增中降解擴(kuò)增產(chǎn)物；所述酸酐是馬來酸酐或者位于烯鍵的兩個(gè)碳原子上的R1、R2官能團(tuán)被其他官能取代物取代的馬來酸酐衍生物；

所述化學(xué)修飾UNG酶的酸酐具有以下結(jié)構(gòu)式：

其中，R1、R2可以為H、CH₃、CH₃CH₂，或F、Cl；

所述化學(xué)修飾UNG酶具有45℃-70℃的熱啟動(dòng)溫度。

5.一種EMA防污染擴(kuò)增反應(yīng)體系，其特征在于，每10μl所述EMA防污染擴(kuò)增反應(yīng)體系包括4mM巰基乙醇，50μM dNTPs，1mM ATP，20nM真核DNA擴(kuò)增環(huán)狀復(fù)合物，40nM增殖細(xì)胞核抗原，20nM polδ復(fù)合酶，0.4μM真核DNA復(fù)制蛋白A，20nM T4噬菌體紫外敏感蛋白1，20nM T4噬菌體紫外敏感蛋白2，200nM正反向引物，DNA模板，200μM dUTP，10ng/ul權(quán)利要求1所述的化學(xué)修飾UNG酶。