[發明專利]一種乳酸菌耐鹽保護劑及其制備和使用方法

在審

• 申請號: 201710489976.3
• 申請日: 2017-06-25
• 公開（公告）號: CN107475116A
• 公開（公告）日: 2017-12-15
• 發明（設計）人: 魯吉珂;林松洋;萬海濤;郝利民;劉鑫;魯來政;康巧珍
• 申請（專利權）人: 鄭州大學
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種乳酸菌耐鹽保護劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

將培養至對數期的菌體進行梯度降溫或梯度高鹽培養處理；

將菌體進行洗滌離心處理，收集菌體；

將菌體破碎；

離心收集上清液，并進行膜過濾除菌，獲得耐鹽保護劑。

2.如權利要求1所述的耐鹽保護劑的制備方法，其特征在于，所述的梯度降溫處理包括在31℃~0、0~-45℃、-45~-80℃，每個溫度梯度下處理0.5~5h。

3.如權利要求1所述的耐鹽保護劑的制備方法，其特征在于，所述的梯度高鹽培養處理包括在2%NaCl、3%NaCl、4%NaCl每個鹽濃度梯度下依次培養2~6h、18~24h、60~70h。

4.如權利要求1所述的耐鹽保護劑的制備方法，其特征在于，所述將菌體進行洗滌離心處理，收集菌體包括：

將菌體在轉速為6000rpm，溫度為0~6℃下進行離心10~20min；

菌體用緩沖液洗滌，緩沖液為摩爾濃度0.075M的PBS緩沖溶液，其中, 菌體的質量和緩沖液的體積配比為1g：（30~50）ml；洗滌兩次，棄上清，收集菌體。

5.如權利要求1所述的耐鹽保護劑的制備方法，其特征在于，所述將菌體破碎包括：

菌體重懸于60ml的0.075M PBS緩沖液中，采用超聲破碎，破碎條件為：功率為300~350w，超聲5s，停止5s，共超聲30~60min。

6.如權利要求1所述的耐鹽保護劑的制備方法，其特征在于，所述離心收集上清液，并進行膜過濾除菌處理，獲得耐鹽保護劑包括：

離心條件為10000~15000rpm，溫度為4℃，時間為10~20min；膜過濾孔徑為0.22μm。

7.如權利要求1~6任一所述的耐鹽保護劑的制備方法，其特征在于，所述菌體為乳酸乳球菌、乳酸片球菌、植物乳桿菌中的任一一種。

8.一種耐鹽保護劑，其特征在于，是采用如權利要求1~7任一所述的耐鹽保護劑的制備方法制備的。

9.一種耐鹽保護劑的使用方法，其特征在于，包括以下步驟：

發酵起始時，接種入乳酸菌后，同時將耐鹽保護劑溶液添加到菌體發酵液中，其中，耐鹽保護劑溶液與菌體發酵液的體積比為1:（15~25）。

10.如權利要求9所述的耐鹽保護劑的使用方法，其特征在于，所述的菌體發酵液為生長在高鹽濃度條件下的菌體發酵液。