[發明專利]一種腺苷脫氨酶活性測定方法及腺苷脫氨酶檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201710489359.3
• 申請日: 2017-06-24
• 公開（公告）號: CN109112179A
• 公開（公告）日: 2019-01-01
• 發明（設計）人: 李豐盛;陳壯永
• 申請（專利權）人: 浙江亞培生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/34
• 分類號: C12Q1/34;C12Q1/32;C12Q1/48
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及一種測定腺苷脫氨酶活性的方法，同時本發明還涉及腺苷脫氨酶檢測試劑盒，屬于醫學檢驗測定技術領域。該方法以腺苷為底物，以嘌呤核苷酸磷酸化酶、黃嘌呤脫氫酶為工具酶，使底物轉化并脫氫，再還原氧化型輔酶生成還原型輔酶，在波長340nmnm下檢測還原型輔酶Ⅰ生成量，來計算酶反應速率。本發明反應步驟少，使用原料種類少，試劑穩定性好，好線性范圍寬，靈敏度高，準確度好，便于推廣。

技術領域

本發明涉及一種測定腺苷脫氨酶活性的方法，同時本發明還涉及腺苷脫氨酶檢測試劑盒，屬于醫學檢驗測定技術領域。

背景技術

腺苷脫氨酶是一種巰基酶，是細胞核代謝中，嘌呤核苷酸分解代謝過程中的一個關鍵性的酶，催化腺嘌呤核苷酸氧化分解，最終生成尿酸，隨尿排出體外。在人體中腺苷脫氨酶主要來源于淋巴細胞，由肝臟代謝。測定血液、體液中的腺苷脫氨酶水平對肝病、血液病及免疫系統疾病的診斷、鑒別診斷、治療都很重要，作為肝功能常規檢查項目之一，與肝酶譜檢測能全面地反映肝臟病的酶學改變。其它見于白血病的化療期，有些癌癥，溶血性貧血，良、惡性胸腹水的鑒別，一些自身免疫性疾病等等。

腺苷脫氨酶檢測方法種類繁多，歷史沿革已經歷了四代方法，早期是用腺苷脫氨酶催化腺嘌呤核苷酸水解，產生次黃嘌呤和氨，然后用終點法或速率法測定反應過程中產生氨的量，從而計算血清腺苷脫氨酶活性單位。所需試劑易配制，儀器簡單，但試劑穩定性差，但靈敏度低，易受外源性和內源性NH₃影響，空白過高，精密度、準確度差。

現在市面上普遍采用第四代方法，反應原理如下：

腺苷在腺苷脫氨酶作用下脫氨基生成次黃苷，次黃苷在黃嘌呤核苷酸磷酸化酶作用下生成次黃嘌呤，次黃嘌呤在黃嘌呤氧化酶作用下生成尿酸和過氧化氫，過氧化氫被過氧化物酶分解產生原子氧，氧化苯胺類顯色劑和4-氨基安替比林反應生成有色醌，顯色強度與腺苷脫氨酶活力成正比。該方法靈敏度高，線性范圍寬，試劑穩定性好，廣受市場歡迎，是目前普遍使用的方法，但是，該方法的反應步驟多，所用的酶和顯色劑多，隨著時間變化，試劑空白會因顯色劑的緩慢氧化而增高，試劑成本也高。

另外還有許多發明的方法，申請號200410041906.4，200410041907.9，200410065300.4，200410065601.7等，采用的方法反應步驟多，內外干擾因素多，各種工具酶價格很高，有些酶市面上沒有供應，很難操作。

發明內容

本發明要解決的技術問題是針對現有技術的不足，提出一種可以克服以上現有技術缺點的腺苷脫氨酶活性的測定方法，同時給出用以實現該方法的腺苷脫氨酶檢測試劑盒。反應步驟少，使用原料種類少，試劑穩定性好，好線性范圍寬，靈敏度高，準確度好，便于推廣。

本發明測定腺苷脫氨酶活性的方法步驟如下：

1)、將樣品與主要由腺苷、磷酸鹽、嘌呤核苷磷酸化酶、氧化型輔酶、黃嘌呤脫氫酶組成的試劑混合，使之發生如下反應：

2)、檢測最終反應物在主波長340nm吸光度上升的速度，測算出腺苷脫氨酶的活性大小。

被測樣品與試劑的比例控制在1/10到1/100。