[發(fā)明專利]一種狼瘡抗凝物檢測試劑

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710488825.6
• 申請日: 2017-06-23
• 公開（公告）號: CN107167618B
• 公開（公告）日: 2019-03-05
• 發(fā)明（設計）人: 賴增祖;葉欣;楊奎東;徐健;鄔榮杰
• 申請（專利權）人: 寧波艾科生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/86
• 分類號: G01N33/86
• 代理公司: 南京艾普利德知識產(chǎn)權代理事務所(特殊普通合伙) 32297
• 代理人: 張鉑

本發(fā)明公開了一種狼瘡抗凝物檢測試劑，包括篩選試劑和確診試劑，所述篩選試劑和確診試劑中均包括緩沖液、激活劑silica和合成磷脂，篩選試劑的合成磷脂含量低，確診試劑的合成磷脂含量高，所述合成磷脂由磷脂酰絲氨酸、磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油和膽固醇組成，其質(zhì)量比為5：30：40：15：10。本發(fā)明所述狼瘡抗凝物檢測試劑靈敏度高，為液體試劑，相對于DRVVT法，批間差異非常小，生產(chǎn)更為容易。

技術領域

本發(fā)明涉及臨床檢測技術領域，具體涉及的一種檢測狼瘡抗凝物的試劑。

背景技術

抗磷脂抗體是一類自身抗體統(tǒng)稱，抗磷脂抗體可結合磷脂或和磷脂形成復合物的蛋白質(zhì)?？沽字贵w根據(jù)該抗體識別的磷脂或磷脂結合蛋白質(zhì)的不同而具有不同的名稱。例如抗心磷脂抗體(anti-cardiolipin antibodies)、抗β2糖蛋白I抗體(anti-β2glycoprotein Iantibodies)、磷脂酰絲氨酸依賴性抗凝血酶原抗體(phosphatidylserine-dependent ant1-prothrombin antibodies)、狼瘡抗凝物(lupusanticoagulant)。狼瘡抗凝物最初是在紅斑狼瘡患者體內(nèi)發(fā)現(xiàn)，后來發(fā)現(xiàn)在許多非紅斑狼瘡患者體內(nèi)也大量存在。狼瘡抗凝物形成的機理還不清楚，可能與用藥有關，比如氯丙嗪，普魯卡因胺，硫唑嘌呤等。狼瘡抗凝物可引起抗磷脂抗體綜合征(antiphospholipidsyndrome)，主要表現(xiàn)為不明原因的血栓拴塞，習慣性流產(chǎn)，血小板減少癥，神經(jīng)障礙。

狼瘡抗凝物是一種獲得性的抗磷脂抗體，對基于磷脂的體外血凝檢測試劑如PT，APTT，DRVVT(dilute russell’s viper venom time test)等具有抑制作用，可以使PT，APTT,DRVVT的凝血時間延長。狼瘡抗凝物可以結合帶負電荷的磷脂復合物例如cardiolipin,phsaphatidylinositol,phosphatidylethanolamine,phosphatidylserine等(J.Clin.Invest.1980，66:397-405)，也可以和磷脂結合的血漿蛋白結合(Arch.Pathol.Lab.Med.，2002，126(11):1424-1429)。雖然在體外狼瘡抗凝物可以抑制磷脂依賴性的血液凝固反應，從而使凝血時間變長，但在體內(nèi)狼瘡抗凝物可引起血栓的形成，具體的機理還不清楚，目前還沒有證據(jù)表明狼瘡抗凝物抑制凝血因子活性。

狼瘡抗凝物的檢測方法主要有DRVVT，APTT等。APTT是一個動態(tài)的檢測方法，用以測定血漿的凝血時間。臨床上APTT用來測定由于凝血因子的減少或缺失引起的出血病癥，內(nèi)源途徑的因子缺陷或非特異性抑制因子的存在。APTT也可以用以評估肝素治療的效果以及肝素治療過程中的監(jiān)測。APTT的檢測首先用激活因子如Kaolin,ellagic acid,sillica激活FXII，在磷脂和鈣離子存在的條件下，血液發(fā)生凝固。通過凝血時間的長短，以確定凝血系統(tǒng)是否正常。引起APTT的延長原因很多，可能是由于內(nèi)源途徑的某個因子的不足或缺失引起，也可能是由于大量的輸血，肝素治療，血凝因子的抑制劑，抗磷脂抗體等因素引起。當APTT延長時，要對每個可能引起的原因進行逐一檢測，以確定引起凝血異常的真實原因。

DRVVT是通過RVV直接激活FX變成FXa,在低濃度的磷脂和鈣離子存在的條件下引起血凝。這個途徑不經(jīng)過內(nèi)源途徑，因此可以避免VIII,IX,XI XII因子缺陷以及這些因子抑制物的干擾。

由于狼瘡抗凝物的異質(zhì)性，至今沒有一個單一的檢測方法能夠檢測所有的抗磷脂抗體的存在。因此狼瘡抗凝物需要兩種及以上的基于不同的機理的檢測方法來確診，這樣才能提高狼瘡抗凝物檢測的準確性。APTT試劑和DRVVT用來監(jiān)測狼瘡抗凝物時，都包含篩選試劑和確診試劑，篩選試劑中磷脂的含量較低，確診試劑中磷脂的含量較高。篩選試劑磷脂含量較低，在狼瘡抗凝物存在時凝血時間會延長。確診試劑中包含較高的磷脂濃度。高濃度的磷脂可以抑制抗磷脂抗體的活性，從而使得凝血時間變短。雖然高濃度的磷脂也可以使正常的血漿凝血時間變短，但其變短的程度很小。而在含有狼瘡抗凝物的血漿，高濃度的磷脂可是凝血時間大大變短。