[發(fā)明專利]用于檢測缺失型α-地中海貧血的引物組及試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710488661.7
• 申請日: 2017-06-23
• 公開（公告）號: CN109112208A
• 公開（公告）日: 2019-01-01
• 發(fā)明（設計）人: 陳治中;卿吉琳
• 申請（專利權）人: 陳治中
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產(chǎn)權代理有限公司 11129
• 代理人: 向群

1.用于檢測缺失型α-地中海貧血的引物組，包括如下引物對：

上下游引物序列分別如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.9所示的3.7F/3.7R；

上下游引物序列分別如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的SEAF/SEAR；

上下游引物序列分別如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的THAIF/THAIR；

上下游引物序列分別如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的4.2F/4.2R；

以及上下游引物序列分別如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的APF/APR。

2.根據(jù)權利要求1所述的引物組，其特征在于，所述檢測指以人體血液、和/或體液、和/或胚胎的遺傳物質、和/或人體基因組DNA為模板，用所述引物組進行PCR擴增后，將所得擴增產(chǎn)物進行電泳即可獲知結果。

3.用于快速檢測缺失型α-地中海貧血的試劑盒，包括權利要求1所述的引物組。

4.根據(jù)權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述快速檢測指，直接以人體血液和/體液或和/或胚胎的遺傳物質為模板，用所述引物組進行PCR擴增后，將所得擴增產(chǎn)物進行電泳即可獲知結果。

5.根據(jù)權利要求2-4任一所述的試劑盒，其特征在于，還包括用于進行PCR和/或電泳的試劑。

6.根據(jù)權利要求2-5任一所述的試劑盒，其特征在于，所述用于進行PCR的試劑包括引物、dNTP、DNA聚合酶、緩沖液、雙蒸水、MgCl₂；

所述用于進行電泳的試劑包括瓊脂糖、蒸餾水、核酸染料；

所述核酸染料選自：EB、GelGreen、SYBR Green Ⅰ、GoldView、GelRed和GelGreen。

7.根據(jù)權利要求2-5任一所述的試劑盒，其特征在于，所述PCR的反應體系為：1～4μl模板、各引物：0.1～1μmol/L、MgCl₂濃度為1.5～5mM/L、dNTP的濃度為100～500μM/L、DNA聚合酶的濃度為1～4U/反應；

優(yōu)選地，所述PCR反應體系包含如下體積份數(shù)的各組分：MightyAmp Taq 0.1-1份、2×MightyAmp Buffer 10份、APF/3.7F 0.1-1.2份、APR 0.1-0.8份、4.2F 0.1-0.6份、4.2R0.1-0.6份、3.7R 0.1-0.6份、SEA-F 0.1-0.6份、SEA-R 0.1-0.6份、THAI-F 0.1-0.6份、THAI-R 0.1-0.6份、模板+超純水2.8-9份；

進一步優(yōu)選地，所述PCR反應體系如下：MightyAmp Taq 0.5μl、2×MightyAmp Buffer10μl、APF/3.7F 0.9μl、APR 0.5μl、4.2F 0.3μl、4.2R 0.3μl、3.7R 0.4μl、SEA-F 0.2μl、SEA-R 0.2μl、THAI-F 0.2μl、THAI-R 0.2μl、模板+超純水6.3μl；

優(yōu)選地，所述引物組中各引物摩爾濃度比例為：

APF/3.7F∶APR∶4.2F∶4.2R∶3.7R∶SEA-F∶SEA-R∶THAI-F∶THAI-R＝9∶5∶3∶3∶4∶2∶2∶2∶2；

所述PCR的反應程序為：95℃5-8分鐘；以94℃30秒、61℃～64℃45秒～1分鐘、72℃130秒為1個循環(huán)，進行31～34個循環(huán)；72℃8分鐘；12℃12秒；

所述電泳指，將所述PCR反應產(chǎn)物置于添加了質量比為0.8～1.5％的瓊脂糖凝膠中，在5V/cm電壓下電泳40～55分鐘；所述瓊脂糖凝膠中添加有體積比0.005％的核酸染料。