[發明專利]用于基因分型檢測東南亞缺失型α地中海貧血的方法及試劑盒

在審

• 申請號: 201710487917.2
• 申請日: 2017-06-23
• 公開（公告）號: CN109112206A
• 公開（公告）日: 2019-01-01
• 發明（設計）人: 陳治中;卿吉琳
• 申請（專利權）人: 陳治中
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 向群

1.用于基因分型檢測東南亞缺失型α地中海貧血的引物組，包括如下引物對：

上下游引物序列分別如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.1所示的APF/APR；

上下游引物序列分別如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的SEAF/SEAR。

2.根據權利要求1所述的引物組，其特征在于，所述檢測指以人體血液和/或體液和/或胚胎的遺傳物質和/或人體基因組DNA為模板，用所述引物組進行PCR擴增后，將所得擴增產物進行電泳即可獲知結果。

3.用于快速檢測東南亞缺失型α地中海貧血基因型的試劑盒，包括權利要求1所述的引物組。

4.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述快速檢測指，以待測樣品包括人體血液和/或體液和/或胚胎的遺傳物質和/或細胞為PCR反應的模板，用所述引物組進行PCR擴增后，將所得擴增產物進行電泳即可獲知結果。

5.根據權利要求2或3所述的試劑盒，其特征在于，還包括用于進行PCR和/或電泳的試劑。

6.根據權利要求2-4任一所述的試劑盒，其特征在于，所述用于進行PCR的試劑包括dNTP、DNA聚合酶、緩沖液、雙蒸水、MgCl₂；

所述用于進行電泳的試劑包括瓊脂糖、蒸餾水、核酸染料；

所述核酸染料選自：EB、GelGreen、SYBR Green Ⅰ、GoldView、GelRed和GelGreen。

7.根據權利要求2-5任一所述的試劑盒，其特征在于，所述PCR的反應體系為：模板1～4ng/μL；各引物：0.05～1μmol/L；MgCl₂濃度為1.5～5mM/L；dNTP的濃度為100～500μM/L；DNA聚合酶的濃度為1～4U/反應；

所述PCR的反應體系優選包括如下體積份數的各組分：MightyAmp Taq 0.1-1份、2×MightyAmp Buffer 10份、APF/SEAF 0.1-1份、SEAR 0.1-1份、APR 0.1-1份、模板+超純水7-9.3份；

所述PCR的反應體系進一步優選包括如下體積份數的各組分：MightyAmp Taq 0.5份、2×MightyAmp Buffer 10份、APF/SEAF 0.5份、SEAR 0.3份、APR 0.2份、模板+超純水8.5份；

優選的，所述引物組各引物摩爾濃度比例如下：

APF/SEAF∶SEAR∶APR＝5∶3∶2；

所述PCR的反應程序為：95℃3-5分鐘；以94℃15-30秒、62-66℃25～35秒、72℃35秒為1個循環，進行34個循環；72℃5分鐘；12℃12秒；

所述PCR的反應程序優選為：95℃5min；以94℃30sec、64℃30sec、72℃35sec為1個循環，進行34個循環；72℃5min；12℃12sec；

所述電泳指，將所述PCR反應產物置于質量比為2～2.5％瓊脂糖凝膠中，在5V/cm電壓下電泳約30～35分鐘；所述瓊脂糖凝膠中還添加有體積比0.005％核酸染料。

8.根據權利要求4或7所述的試劑盒，其特征在于，所述模板還包括固定在固體載體上的人體血液、和/或體液、和/或基因組DNA、和/或胚胎的遺傳物質；

優選地，所述模板可以選自濾紙片干血斑樣品、濾紙片干羊水樣品、濾紙片干漿膜腔液樣品、濾紙片干關節液樣品、濾紙片干唾液樣品、濾紙片干基因組DNA樣品、和/或濾紙片干胚胎遺傳物質樣品。

9.根據權利要求4或8所述的試劑盒，其特征在于，所述人體體液選自下述物質的一種或多種：羊水、胚胎絨毛組織、漿膜腔液、關節液、唾液；所述血液包括外周血、臍帶血、末梢血；所述胚胎的遺傳物質包括配子如精子或卵子、卵裂期胚胎的卵裂球、囊胚滋養外胚層細胞，即囊胚細胞。

10.權利要求1所述的引物組，和/或，權利要求2-9任一所述的試劑盒在制備東南亞缺失型α地中海貧血檢測試劑方面的用途，其特征在于，在標有東南亞缺失型α地中海貧血檢測用途的包裝內放入所述引物組，和/或，在裝有所述引物組的容器上標有東南亞缺失型α地中海貧血檢測用途。