[發(fā)明專利]蘆薈中蘆薈大黃素的提取和測定方法

在審

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• 申請日: 2017-06-23
• 公開（公告）號: CN107311851A
• 公開（公告）日: 2017-11-03
• 發(fā)明（設計）人: 謝曉娜;楊鄭州;張真真
• 申請（專利權）人: 百色學院
• 主分類號: C07C46/10
• 分類號: C07C46/10;C07C50/34;G01N21/33
• 代理公司: 北京天奇智新知識產(chǎn)權代理有限公司11340
• 代理人: 但玉梅

技術領域

本發(fā)明涉及生物制藥技術領域，具體涉及一種蘆薈中蘆薈大黃素的提取和測定方法。

背景技術

蘆薈中含有蘆薈大黃素等有效活性物質，蘆薈大黃素，對于我們人體而言有致瀉的作用，有益于把腸道內的對人體沒有用的物質排解掉，因而達到激發(fā)性輕瀉的一種效果，而這種效果于便秘和痔瘡的治療有特效,尤其是關于老年性便秘一病癥，有明顯的醫(yī)治效果。

傳統(tǒng)提取蘆薈大黃素的方法是熱水浸提法、該法得率低、操作費時、能耗大。超聲輔助法是新型的輔助提取技術，具有操作步驟簡單、節(jié)省溶劑、處理時間短等優(yōu)點。但是，提取的蘆薈大黃素純度不高，且提取率提高不大。

發(fā)明內容

本發(fā)明的發(fā)明目的是，針對上述問題，提供一種蘆薈中蘆薈大黃素的提取和測定方法，該提取方法采用微波輔助法和超聲輔助法協(xié)同作用，具有操作步驟簡單、節(jié)省溶劑、產(chǎn)物收率高、處理時間短等優(yōu)點；且采用分光光度法測定蘆薈大黃素含量，簡單快捷，結果誤差小。

為達到上述目的，本發(fā)明所采用的技術方案是：

一種蘆薈中蘆薈大黃素的提取和測定方法，包括以下步驟，

S1、準備樣品：采摘鮮嫩的蘆薈葉，用清水把蘆薈葉上的灰塵清洗干凈，然后輕輕的用手術刀去掉葉上的刺，再用手術刀橫切成3～5毫米的薄片平鋪在托盤上，然后放入烘箱中，在50～55℃條件下烘10～12小時，最后把烘干的蘆薈葉粉碎成粉末狀制成蘆薈粉，放在棕色試劑瓶里避光并貼上標簽，備用。

S2、樣品預處理：稱取步驟S1準備的蘆薈粉，先加入乙酸酸解，然后加入乙醇，靜置20～40min得到提取液。

S3、微波處理：將所述提取液微波處理,所述微波處理設定功率為300～500W，控制微波時間以提取液溫度達到75～80℃時為止。

S4、超聲波提取：將微波處理后的提取液超聲波提取30～40min,提取溫度為40～45℃，超聲波功率為100w，然后離心過濾得上清液和殘渣。

S5、超聲波二次提取：將步驟S4中的殘渣加入乙醇進行超聲波二次提取，在40～45℃條件下提取10～20分鐘，超聲波功率為100w，然后離心得上清液。

S6、蘆薈大黃素測定：將步驟S3和S4得到的上清液混合得到待測液，用分光光度法測定待測液中蘆薈大黃素的含量。

作為一種優(yōu)選的方案，步驟S1中，所述蘆薈粉為40～60目。

作為一種優(yōu)選的方案，步驟S2中，酸解過程中，蘆薈粉與乙酸的料液比為1:8～10；乙醇加入量為乙酸的2～2.5倍。

作為一種優(yōu)選的方案，步驟S4和S5中，超聲結束后用移液槍吸取提取液放進離心管中，再以每分鐘3000轉的轉速，進行離心10分鐘，離心結束后用移液槍慢慢吸取上清液到容量瓶中。

作為一種優(yōu)選的方案，步驟S5中，加入的乙醇的量為步驟S2中乙醇的一半。

作為一種優(yōu)選的方案，所述分光光度法測定蘆薈大黃素的具體步驟為：

①對照品溶液配制：稱量蘆薈大黃素對照品放進燒杯中，再用少量無水C₂H₅OH進行溶解，最后用無水C₂H₅OH定容到50毫升的容量瓶中，制得濃度為每毫升50微克的蘆薈大黃素對照品溶液；

②波長掃描：用比色皿盛裝一定量的蘆薈大黃素對照品溶液，以無水C₂H₅OH為空白溶液，放進分光光度計的槽中，在200～600納米波長間掃描。

③繪制標準曲線：分別量取蘆薈大黃素對照品溶液8、6、4、2、1毫升到10毫升容量瓶中，定容制得濃度分別為每毫升40微克，每毫升30微克，每毫升20微克，每毫升10微克，每毫升5微克的系列溶液，測量在420納米波長下的吸光值，從而繪制標準曲線，以吸光值為縱坐標，蘆薈大黃素標準液濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得蘆薈大黃素的回歸方程為y＝0.0463x-0.0138，R²＝0.9994。

④樣品的測定：吸取最終待測液，80％C₂H₅OH作為空白管，在波長為420納米波長下測定，測定3～5次。按照制得的標準曲線的回歸方程，計算曲線中蘆薈大黃素濃度，最后計算出蘆薈大黃素的含量。

具體計算方法為，將上述計算的蘆薈大黃素濃度，再代入公式(1)：

蘆薈大黃素含量(mg)＝曲線中計算出的蘆薈大黃素濃度(μg/ml)×50ml×樣品稀釋倍數(shù)×10^-3公式(1)