[發(fā)明專利]用于基因分型檢測α⁰缺失型地中海貧血的引物組及試劑盒在審

申請?zhí)枺?/td>	201710486949.0	申請日：	2017-06-23
公開（公告）號：	CN109112202A	公開（公告）日：	2019-01-01
發(fā)明（設(shè)計(jì)）人：	陳治中;卿吉琳	申請（專利權(quán)）人：	陳治中
主分類號：	C12Q1/6883	分類號：	C12Q1/6883;C12N15/11
代理公司：	北京海虹嘉誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11129	代理人：	向群
地址：	530012 廣西壯***	國省代碼：	廣西;45
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摘要：
搜索關(guān)鍵詞：	引物組引物序列試劑盒基因分型檢測地中海貧血檢測引物靈敏應(yīng)用安全
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【權(quán)利要求書】：

1.用于基因分型檢測α⁰缺失型地中海貧血的引物組，包括如下引物對：

上下游引物序列分別如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的APF/APR；

上下游引物序列分別如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3所示的SEAF/SEAR；

上下游引物序列分別如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的THAIF/THAIR。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的引物組，其特征在于，所述檢測指以人體血液、和/或體液、和/或胚胎的遺傳物質(zhì)、和/或人體基因組DNA為模板，用所述引物組進(jìn)行PCR擴(kuò)增后，將所得擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳即可獲知結(jié)果。

3.用于快速檢測α⁰缺失型地中海貧血基因型的試劑盒，包括權(quán)利要求1所述的引物組。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述快速檢測指，直接以人體血液和/體液或和/或胚胎的遺傳物質(zhì)為模板，用所述引物組進(jìn)行PCR擴(kuò)增后，將所得擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳即可獲知結(jié)果。

5.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的試劑盒，其特征在于，還包括用于進(jìn)行PCR和/或電泳的試劑。

6.根據(jù)權(quán)利要求2-4任一所述的試劑盒，其特征在于，所述用于進(jìn)行PCR的試劑包括dNTP、DNA聚合酶、緩沖液、雙蒸水、MgCl₂；

所述用于進(jìn)行電泳的試劑包括瓊脂糖、蒸餾水、核酸染料；

所述核酸染料選自：EB、GelGreen、SYBR GreenⅠ、GoldView、GelRed和GelGreen。

7.根據(jù)權(quán)利要求2-5任一所述的試劑盒，其特征在于，所述PCR的反應(yīng)體系為：模板1～10ng/μL；各引物：0.05～1μmol/L；MgCl₂濃度為1.5～5mM/L；dNTP的濃度為100～500μM/L；DNA聚合酶的濃度為1～4U/反應(yīng)；

所述PCR反應(yīng)體系優(yōu)選為：包含下述體積份數(shù)的各組分：MightyAmp Taq 0.1-1份、2×MightyAmp Buffer 10份、SEAF/APF 0.1-1份、SEAR 0.1-1份、APR 0.1-1份、THAIF 0.1-1份、THAIR 0.1-1份、模板+超純水4-9.4份；

所述PCR反應(yīng)體系進(jìn)一步優(yōu)選為：包含下述體積份數(shù)的各組分：MightyAmp Taq 0.5份、2×MightyAmp Buffer 10份、SEAF/APF 0.5份、SEAR 0.3份、APR 0.2份、THAIF 0.3份、THAIR 0.3份、模板+超純水7.9份；

優(yōu)選地，所述引物組各引物摩爾濃度比例如下：

SEAF/APF∶SEAR∶APR∶THAIF∶THAIR＝5∶3∶2∶3∶3；

所述PCR的反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃3-5分鐘；以94℃15-30秒、62-66℃25～35秒、72℃35秒為1個循環(huán)，進(jìn)行30～36個循環(huán)；72℃5分鐘；12℃12秒；

所述PCR的反應(yīng)程序，優(yōu)選為：95℃5分鐘；以94℃30秒、64℃30秒、72℃35秒為1個循環(huán)，進(jìn)行34個循環(huán)；72℃5分鐘；12℃12秒；

所述電泳指，將所述PCR反應(yīng)產(chǎn)物置于添加了質(zhì)量比為0.8～1.5％的瓊脂糖凝膠中，在5V/cm電壓下電泳40～55分鐘；所述瓊脂糖凝膠中添加有體積比0.005％的核酸染料。

8.根據(jù)權(quán)利要求4或7所述的試劑盒，其特征在于，所述模板還包括固定在固體載體上的人體血液、和/或體液、和/或基因組DNA、和/或胚胎遺傳物質(zhì)；

優(yōu)選地，所述模板可以選自濾紙片干血斑樣品、濾紙片干羊水樣品、濾紙片干漿膜腔液樣品、濾紙片干關(guān)節(jié)液樣品、濾紙片干唾液樣品、濾紙片干基因組DNA樣品、和/或?yàn)V紙片干胚胎的遺傳物質(zhì)樣品。

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