[發(fā)明專利]與小麥抗穗發(fā)芽性狀相關的KASP分子標記及其應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710486631.2
• 申請日: 2017-06-23
• 公開（公告）號: CN107217098A
• 公開（公告）日: 2017-09-29
• 發(fā)明（設計）人: 王際睿;周勇;唐豪
• 申請（專利權）人: 四川農業(yè)大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司11002
• 代理人: 王文君,黃爽

1.與小麥抗穗發(fā)芽性狀相關的KASP分子標記，其特征在于，共包含3個分子標記，①分子標記AX-111578083與抗穗發(fā)芽基因myb10-A1之間的遺傳圖距為0.35Mb；②分子標記AX-111624595與抗穗發(fā)芽區(qū)段R-loci之間的遺傳圖距為3.55Mb；③分子標記AX-110772653與抗穗發(fā)芽區(qū)段R-loci之間的遺傳圖距為3.73Mb；3個分子標記的核苷酸序列分別如SEQ ID NO:1-3所示。

2.基于KASP技術開發(fā)的用于擴增權利要求1所述分子標記的引物，其特征在于，包括正向引物AL1、正向引物AL2和反向引物C；

其中，擴增分子標記AX-111578083的引物序列分別如SEQ ID NO:4-6所示，擴增分子標記AX-111624595的引物序列分別如SEQ ID NO:7-9所示，擴增分子標記AX-110772653的引物序列分別如SEQ ID NO:10-12所示。

3.含有權利要求2所述引物的用于鑒定與小麥抗穗發(fā)芽性狀相關的KASP分子標記的檢測試劑盒。

4.權利要求1所述分子標記、權利要求2所述引物或權利要求3所述試劑盒在小麥抗穗發(fā)芽材料創(chuàng)制中的應用。

5.權利要求1所述分子標記、權利要求2所述引物或權利要求3所述試劑盒在分子標記輔助小麥抗穗發(fā)芽選擇育種中的應用。

6.權利要求1所述分子標記、權利要求2所述引物或權利要求3所述試劑盒在選育具有穗發(fā)芽抗性的小麥資源中的應用。

7.根據(jù)權利要求6所述的應用，其特征在于，包括以下步驟：

1)提取待測小麥樣品的DNA；

2)取濃度為50-100ng/μl的模板DNA 1.00μl，引物混合液0.14μl，KASP Master Mix 5.00μl，50mM的MgCl₂溶液0.08μl，H₂O 3.78μl，進行PCR擴增；引物混合液中正向引物AL1和正向引物AL2的終濃度均為10μM，反向引物C的終濃度為10μM；

3)采用熒光檢測儀分析PCR擴增產物基因型。

8.根據(jù)權利要求7所述的應用，其特征在于，步驟2)PCR反應條件為：95℃預變性15分鐘；第一步擴增反應：95℃變性20秒，68℃梯度退火并延伸60秒，10個循環(huán)，每個循環(huán)退火及延伸的溫度降低1℃；第二步擴增反應，94℃變性20秒，57℃退火并延伸60秒，30個循環(huán)；12℃保存。

9.根據(jù)權利要求7或8所述的應用，其特征在于，步驟3)具體為：利用生物學軟件對PCR擴增產物進行分型：等位位點AX-111578083-G為攜有抗穗發(fā)芽優(yōu)異等位類型植株，等位位點AX-111624595-C為攜有抗穗發(fā)芽優(yōu)異等位類型植株，等位位點AX-110772653-T為攜有抗穗發(fā)芽優(yōu)異等位類型植株。