[發(fā)明專利]基于高分辨率溶解曲線鑒定梨果肉低石細(xì)胞含量的SNP標(biāo)記及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710485795.3
• 申請(qǐng)日: 2017-06-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107058601B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-01-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳俊;薛程;張紹鈴;谷超;張明月;秦夢(mèng)帆;殷豪;謝智華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責(zé)任公司 32218
• 代理人: 傅婷婷;徐冬濤

1.與梨果肉石細(xì)胞含量的緊密相關(guān)的SNP標(biāo)記引物對(duì)，其特征在于選自以下任意一對(duì)：Psc397-7-F：SEQ ID NO.1，Psc397-7-R：SEQ ID NO.2;或者Psc397-12-F：SEQ ID NO.3，Psc397-12-R：SEQ ID NO.4。

2.權(quán)利要求1所述的SNP標(biāo)記引物對(duì)在鑒定梨果肉高或低石細(xì)胞含量中的應(yīng)用。

3.權(quán)利要求1所述的SNP標(biāo)記引物對(duì)在梨果肉石細(xì)胞含量早期鑒定和篩選的分子育種中的應(yīng)用。

4.一種基于高分辨率溶解曲線鑒定梨果肉高或低石細(xì)胞含量的方法，其特征在于采用權(quán)利要求1所述的SNP標(biāo)記引物對(duì)對(duì)果肉石細(xì)胞含量高的對(duì)照梨品種和果肉石細(xì)胞含量低的對(duì)照梨品種，以及待鑒定果肉石細(xì)胞含量的梨品種進(jìn)行高分辨率溶解曲線分析，通過(guò)對(duì)待鑒定梨品種的高分辨率溶解曲線與上述兩種對(duì)照梨品種的高分辨率溶解曲線的比較，鑒定該梨品種的果肉石細(xì)胞含量是高還是低；其中所述的果肉石細(xì)胞含量高的對(duì)照梨品種選自：碭山酥梨；所述的果肉石細(xì)胞含量低的對(duì)照梨品種選自：脆綠。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于所述的高分辨率溶解曲線反應(yīng)體系按照LightCycler 480 High Resolution Melting Master試劑盒中的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，HRM分析在LightCycler480 II 熒光定量PCR儀上進(jìn)行。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于高分辨率溶解曲線反應(yīng)體系為20μL：含有30ng梨基因組DNA模板，1 × Master Mix，2.5mmol/L MgCl₂，200nM權(quán)利要求1所述的SNP標(biāo)記引物對(duì)；擴(kuò)增程序采用降落式PCR：95℃預(yù)變性10 min，然后95℃變性10 s、65-55℃退火10s，每循環(huán)下降0.5℃，72℃延伸10s的程序進(jìn)行45個(gè)循環(huán)；PCR循環(huán)結(jié)束后進(jìn)行熔解，其程序?yàn)椋?5℃1 min，40℃1 min，65℃1 s，再?gòu)?0℃連續(xù)升溫至95℃， 每升高0.04℃，收集熒光1次，最后降溫至40℃；最后，在LightCycler480 II 的Gene Scanning軟件中自動(dòng)生成擴(kuò)增產(chǎn)物的熔解曲線。