[發明專利]一種無血清雜交瘤細胞培養基

在審

• 申請號: 201710484822.5
• 申請日: 2017-06-23
• 公開（公告）號: CN107099508A
• 公開（公告）日: 2017-08-29
• 發明（設計）人: 曲寶赤
• 申請（專利權）人: 曲寶赤
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司11246
• 代理人: 文芳

技術領域

本發明涉及一種無血清雜交瘤細胞培養基。

背景技術

自從1975年Kohler和Milstein建立雜交瘤技術以來，由雜交瘤細胞生產的單克隆抗體已應用到許多方面，特別是在疾病診斷和治療及親和層析分離方面,單克隆抗體具有十分誘人的應用前景，其中CD3單抗于1987年被美國FDA批準用于臨床，1990年已達到1千萬美元的年產值。美國制藥工業協會調查報告顯示，單抗位列所有醫藥生物技術產品之首。

單克隆抗體生產分體內法和體外法，體外細胞培養途徑具有重要的優點，如：1.可以采用單元操作法培養，隨著規模增大，降低生產成本；2.減少鼠類動物感染疾病給產物帶來的污染，避免鼠的其它抗體的存在；3.可以生產人的單克隆抗體；4.過程可以工程化和自動控制，提高了重演性。

隨著單克隆抗體的大量應用，雜交瘤細胞的大規模培養技術日趨成熟。英國Celltech公司的1萬升氣升式反應器已經開發成功，并應用于抗人ABO血型單抗的生產。目前，雜交瘤細胞的培養已不再以反應器培養規模作為重要的指標，而把更多的精力集中于雜交瘤細胞的代謝調控、反應器的操作模式和控制策略及無血清無蛋白培養技術等方面，以提高雜交瘤細胞密度和單抗的生產率，生產雜蛋白含量低、容易分離純化的體內用單克隆抗體。

相對于貼壁依賴性細胞，雜交瘤細胞培養的放大可以更多地借助于微生物發酵的經驗。八十年代初，已利用生物反應器大規模培養雜交瘤細胞。為了使培養放大工作更加有效，細胞高密度培養的研究引起重視，而首先遇到的則是培養條件的優化，并逐漸過渡到代謝的調控等方面。

發明內容

針對上述現有技術，本發明提供了一種無血清雜交瘤細胞培養基，適合工業抗體生產，配合反應器或搖瓶培養，可維持雜交瘤細胞的高密度生長。本發明的無血清培養基，在代謝調控，細胞抗體表達以及高密度維持做了很大改進。

本發明是通過以下技術方案實現的：

一種無血清雜交瘤細胞培養基，是由以下濃度的組分組成的，各濃度單位若無特別說明，均為mg/L：

L-精氨酸100～300；

CuSO4·5H₂O 0.0005～0.005；

L-天門冬酰胺25～75；

L-天門冬氨酸10～30；

L-谷氨酸10～30；

Ni(NO₃)₂·6H₂O 0.00002～0.0002；

L-谷氨酰胺0～500；

ZnSO₄·7H₂O 0.06～0.6；

甘氨酸5～15；

CoCl₂·6H₂O 0.001～0.008；

L-組氨酸10～30；

NaSiO₃·9H₂O 0.001～0.01；

L-異亮氨酸25～75；

Na₃VO₄·12H₂O 0.0005～0.005；

L-賴氨酸鹽酸20～60；

SnC1₂·2H₂O 0.00001～0.0001；

L-蛋氨酸10～30；

Na₂SeO₃ 0.002～0.01；

L-苯丙氨酸10～30；

FeSO₄·7H₂O 0.2～1.6；

L-脯氨酸10～30；

葡萄糖1000～4000；

L-絲氨酸15～45；

維生素C O.176～0.704；

L-蘇氨酸10～30；

對羥基苯甲酸0.5～1.5；

L-色氨酸5～15；

丙酮酸鈉55～550；

L-纈氨酸1O～30；

亞油酸0.01～0.05；

L-亮氨酸25～75；

β-巰基乙醇0.8～4.0；

二水L-酪氨酸二鈉144～432；

乙醇胺1～5；

L-胱氨酸二鹽酸25～75；

地塞米松0.001～0.005；

人轉鐵蛋白5～50；

胰島素：8～20

純化人轉鐵蛋白：1～30；

膽固醇：20～60；