[發(fā)明專利]一種抗氧化肽及其分離制備方法和用途有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201710484413.5 | 申請(qǐng)日： | 2017-06-23 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN107245094B | 公開（公告）日： | 2020-08-18 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 趙謀明;蘇國萬;趙詡君 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 廣東華肽生物科技有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C07K7/06 | 分類號(hào)： | C07K7/06;C12P21/06;C07K1/20;C07K1/16;A61K38/08;A61P39/06;A23L33/18 |
| 代理公司： | 廣州市華學(xué)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245 | 代理人： | 郭煒綿 |
| 地址： | 526238 廣東省肇慶市*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 氧化 及其 分離 制備 方法 用途 | ||
本發(fā)明公開了一種抗氧化肽及其分離制備方法和用途，該抗氧化肽氨基酸序列為Pro?Ala?Tyr?Cys?Ser，其分離制備方法包括如下步驟：將鳳尾魚加混合酶酶解得到酶解液，酶解液上Sephadex G?25凝膠柱洗脫，收集各洗脫峰并分別測定其超氧陰離子自由基清除能力，清除能力最高的組分采用反相高效液相色譜進(jìn)一步純化，收集各洗脫峰，超氧陰離子自由基清除能力最高的組分即為本發(fā)明的多肽。本發(fā)明采用生物酶解技術(shù)及色譜分離技術(shù)制備出一種具有明顯超氧陰離子清除能力的蛋白肽，制備方法簡單可行，制得的產(chǎn)品純度高。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于蛋白質(zhì)精深加工領(lǐng)域，具體涉及一種抗氧化肽及其分離制備方法和用途。
背景技術(shù)
研究表明，人類神經(jīng)退行性疾病，例如，阿茲海默癥、帕金森癥等與大腦神經(jīng)元有密切的關(guān)系。到目前為止，科研工作者們發(fā)現(xiàn)人類退行性疾病的病理非常復(fù)雜。氧化應(yīng)激是指體內(nèi)生成的自由基超過機(jī)體內(nèi)源性抗氧化能力的平衡點(diǎn)，從而導(dǎo)致組織和細(xì)胞氧化損傷的過程，這與神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病密切相關(guān)。在眾多病例中，研究對(duì)大腦氧化應(yīng)激的抗氧化作用成為了人們預(yù)防、改善或治療神經(jīng)退行性疾病的突破點(diǎn)。超氧陰離子會(huì)在金屬離子催化下發(fā)生Fenton(芬頓)反應(yīng)產(chǎn)生高活性的·OH。故實(shí)驗(yàn)中超氧自由基清除率可以評(píng)價(jià)抗氧化劑清除活性氧的能力。
另外，食物來源的相關(guān)成分已成為預(yù)防和/或治療神經(jīng)退行性疾病及抑郁等病癥的潛在目標(biāo)。特別是老年癡呆癥，日常飲食治療更能夠避免藥物干預(yù)治療的不利因素。在眾多食物來源的研究對(duì)象中，多肽類物質(zhì)因具有來源廣泛、制備工藝簡單、無副作用、易被人體吸收等優(yōu)點(diǎn)，逐漸成為人們研究的熱點(diǎn)。
有研究表明食源性抗氧化成分可以有效維持氧化與抗氧化之間的平衡，如食源性抗氧化蛋白及其分解得到的抗氧化多肽吸引越來越多的關(guān)注。從花生、大豆、發(fā)酵乳飲料以及魚皮蛋白酶解產(chǎn)物中分離獲得多種多肽，已經(jīng)被證實(shí)具有抗氧化作用。其中，豬腦經(jīng)水解獲得的含有85％游離氨基酸和15％低分子多肽的腦活素(市場產(chǎn)品)具有改善記憶、抗氧化、保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞的作用。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的首要目的在于提供一種抗氧化肽，其氨基酸序列為Pro-Ala-Tyr-Cys-Ser。
本發(fā)明的另一目的在于提供上述多肽的分離制備方法。
本發(fā)明的再一目的在于提供上述多肽的用途。
本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
一種多肽，其氨基酸序列為Pro-Ala-Tyr-Cys-Ser，分子量為539.20Da，具有明顯的超氧陰離子清除效果，具有抗氧化功效。
上述多肽的分離制備方法，包括如下步驟：
(1)將鳳尾魚去頭去內(nèi)臟，絞成肉糜，加水混合，加入占肉糜質(zhì)量0.5～1.2％的混合酶，在45-60℃下酶解6～10h后，滅酶，冷卻至室溫后，離心，過濾收集濾液，為鳳尾魚酶解液；
步驟(1)所述的加水混合，水與肉糜的質(zhì)量比為(1～3):1；
步驟(1)所述的混合酶，由木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶組成；其中木瓜蛋白酶占肉糜質(zhì)量的0.2～0.5％，堿性蛋白酶占肉糜質(zhì)量的0.3～0.7％；所述的堿性蛋白酶優(yōu)選Alcalase 2.4L；
步驟(1)所述的滅酶是將反應(yīng)物在95℃下加熱15min；
步驟(1)所述的離心優(yōu)選在3500r/min轉(zhuǎn)速下離心10min；
(2)將鳳尾魚酶解液添加至Sephadex G-25凝膠柱，用去離子水以0.5～1.5mL/min的流速進(jìn)行洗脫，檢測波長為220nm，收集各洗脫峰并分別測定其超氧陰離子自由基清除能力，選取超氧陰離子自由基清除能力最高的組分進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)；
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