[發明專利]一種特異靶向豬IRS1基因的sgRNA導向序列及其應用在審
| 申請號： | 201710483310.7 | 申請日： | 2017-06-23 |
| 公開（公告）號： | CN107227307A | 公開（公告）日： | 2017-10-03 |
| 發明（設計）人： | 牟彥雙;翁曉剛;劉忠華;呂嘉偉;郭佳 | 申請（專利權）人： | 東北農業大學 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C12N15/85;C12N15/90 |
| 代理公司： | 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司23211 | 代理人： | 梁超 |
| 地址： | 150030 黑龍*** | 國省代碼： | 黑龍江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 特異 靶向 irs1 基因 sgrna 導向 序列 及其 應用 | ||
1.一種特異靶向豬IRS1基因的sgRNA導向序列，其特征在于該序列為IRS1-SgRNA1，IRS1-SgRNA1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.權利要求1所述的特異靶向豬IRS1基因的sgRNA導向序列在敲除豬IRS1基因中的應用，具體如下：
一、在豬IRS1基因的sgRNA導向序列的5’端加上CACC得到正向寡核苷酸；同時根據導向序列獲得得其對應的DNA互補鏈，并且再起5’端加上AAAC得到反向寡核苷酸；分別合成上述正向寡核苷酸和反向寡核苷酸，將合成的正向寡核苷酸和反向寡核苷酸變性，退火，形成雙鏈；
二、將步驟一制得的雙鏈DNA與CRISPR/Cas9載體連接，得到重組敲除表達載體；
三、將步驟二制得的重組敲除表達載體轉染細胞，篩選穩定轉染細胞，得到成功敲除IGFBP3基因的細胞。
3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于步驟二中所述的CRISPR/Cas9載體為pX330載體。
4.根據權利要求2所述的應用，其特征在于步驟三中所述轉染細胞的方法為脂質體轉染法。
5.根據權利要求2所述的應用，其特征在于步驟三中所述篩選所用藥物為嘌呤霉素。
6.根據權利要求2所述的應用，其特征在于步驟三中所述的細胞為豬成纖維細胞。
7.權利要求1所述的特異靶向豬IRS1基因的sgRNA導向序列在特異識別和靶向修飾豬IRS1基因中的應用。
8.權利要求1所述的特異靶向豬IRS1基因的sgRNA導向序列在構建豬IRS1基因突變庫中的應用。
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