[發(fā)明專利]一種檢測金黃色葡萄球菌的引物組合物、試劑盒及其雙信號通道檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710482548.8
• 申請日: 2017-06-22
• 公開（公告）號: CN107058599A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 方雪恩;王欣珍;王雄;孔繼烈
• 申請（專利權(quán)）人: 上海速創(chuàng)診斷產(chǎn)品有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/14;C12N15/11;C12R1/445
• 代理公司: 上海申新律師事務(wù)所31272
• 代理人: 竺路玲

1.一種用于檢測金黃色葡萄球菌的引物組合物，其特征在于，包括SEQ ID No：1所示序列的外引物1，SEQ ID No：2所示序列的外引物2，SEQ ID No：3所示序列的內(nèi)引物1以及SEQ ID No：4所示序列的內(nèi)引物2。

2.一種含有權(quán)利要求1所述的引物組合物的的試劑盒。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括反應(yīng)體系，該反應(yīng)體系包括SEQ ID No：1-SEQ ID No：4所示序列的引物、模板DNA、指示劑、DNA嵌入式染料、Bst DNA聚合酶、dNTPs、Mg2+、緩沖液和水。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，每100μL反應(yīng)體系中，含有2μL外引物1、2μL外引物2、16μL內(nèi)引物1、16μL內(nèi)引物2、0.5～1.5μL顏色指示劑、2.5～5μL DNA嵌入式染料。

5.一種利用權(quán)利要求2～4中任一項所述的試劑盒檢測金黃色葡萄球菌的用于非診斷和治療目的的雙信號通道檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1)待檢樣品核酸提取；

步驟2)恒溫擴(kuò)增反應(yīng)：在預(yù)定體積的含有顏色指示劑、DNA嵌入式染料、待檢樣品DNA及其擴(kuò)增引物的反應(yīng)體系中進(jìn)行恒溫擴(kuò)增反應(yīng)；

步驟3)結(jié)果判讀：根據(jù)擴(kuò)增結(jié)束后指示劑的顏色變化進(jìn)行直接肉眼判讀和/或利用DNA嵌入式染料結(jié)合特定儀器檢測核酸擴(kuò)增曲線進(jìn)行判讀。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測病原微生物的雙信號通道檢測方法，其特征在于，步驟2)中指示劑包括HNB、Calcein、甲酚紅、酚紅、間甲酚紫、溴甲酚紫、中性紅、萘酚酞、百里酚藍(lán)。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測病原微生物的雙信號通道檢測方法，其特征在于，步驟2)中DNA嵌入式染料包括SYBR Green、Ever Green、Pico Green、SYTO系列。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測病原微生物的雙信號通道檢測方法，其特征在于，步驟2)中的恒溫擴(kuò)增反應(yīng)在微流控芯片或反應(yīng)試管中進(jìn)行。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測病原微生物的雙信號通道檢測方法，其特征在于，所述微流控芯片的制作包括如下步驟：

a)微流控芯片采用經(jīng)過表面處理的高透明材料制備；

b)對步驟a)制備的微流控芯片采用等離子清洗機(jī)沖洗其表面，用惰性氣體風(fēng)干；

c)對步驟b)中風(fēng)干后的微流控芯片采用壓敏鍵合膜進(jìn)行封裝。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的檢測病原微生物的雙信號通道檢測方法，其特征在于，所述高透明材料包括PC、PMMA、COC。