[發(fā)明專(zhuān)利]用于檢測(cè)百日咳鮑特氏菌的引物探針組合、試劑盒及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710479949.8
• 申請(qǐng)日: 2017-06-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107190072A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-09-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李俊;農(nóng)文燕;馬東禮;姜含芳;劉孝榮;陳虹宇;蔡德豐;朱純青
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 深圳市泰爾迪恩生物信息科技有限公司;深圳市兒童醫(yī)院
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 深圳市中原力和專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙)44289
• 代理人: 謝芝柏

1.一種用于檢測(cè)百日咳鮑特氏菌的引物探針組合，其特征在于，包括用于檢測(cè)百日咳鮑特氏菌的上游引物、下游引物及探針，

所述上游引物如序列表中SEQ ID NO.1所示；

所述下游引物如序列表中SEQ ID NO.2所示；

所述探針如序列表中SEQ ID NO.3所示；

其中所述探針的5＇端連接有FAM熒光基團(tuán)，其3＇端連接有TAMRA淬滅基團(tuán)。

2.一種試劑盒，其特征在于，包括PCR反應(yīng)液，所述PCR反應(yīng)液包括如權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)百日咳鮑特氏菌的引物探針組合。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述上游引物和所述下游引物的終濃度均為0.8μM，所述探針的終濃度為0.4μM。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述PCR反應(yīng)液還包括熒光定量PCR擴(kuò)增試劑、內(nèi)標(biāo)質(zhì)粒、用于擴(kuò)增內(nèi)標(biāo)質(zhì)粒中內(nèi)標(biāo)片段的內(nèi)標(biāo)引物和用于檢測(cè)內(nèi)標(biāo)片段的內(nèi)標(biāo)探針，所述內(nèi)標(biāo)引物包括內(nèi)標(biāo)上游引物和內(nèi)標(biāo)下游引物，

所述內(nèi)標(biāo)上游引物如序列表中SEQ ID NO.4所示；

所述內(nèi)標(biāo)下游引物如序列表中SEQ ID NO.5所示；

所述內(nèi)標(biāo)探針如序列表中SEQ ID NO.6所示；

其中，所述內(nèi)標(biāo)探針的5＇端連接有HEX熒光基團(tuán)，其3＇端連接有TAMRA淬滅基團(tuán)。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述內(nèi)標(biāo)上游引物和所述內(nèi)標(biāo)下游引物的終濃度均為0.8μM，所述內(nèi)標(biāo)探針的終濃度為0.4μM。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述內(nèi)標(biāo)質(zhì)粒為以pUC57為載體的內(nèi)標(biāo)片段重組質(zhì)粒，其終濃度為1×10³copy/ml。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的PCR反應(yīng)液，其特征在于，所述內(nèi)標(biāo)質(zhì)粒中內(nèi)標(biāo)片段的DNA序列如序列表中SEQ ID NO.7所示。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括陰性質(zhì)控品、陽(yáng)性質(zhì)控品及工作標(biāo)準(zhǔn)品。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述陰性質(zhì)控品為生理鹽水。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述陽(yáng)性質(zhì)控品為1×10⁵copy/ml的以pUC57為載體的百日咳鮑特氏菌的基因片段重組質(zhì)粒。

11.根據(jù)權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述工作標(biāo)準(zhǔn)品包括第一工作標(biāo)準(zhǔn)品、第二工作標(biāo)準(zhǔn)品、第三工作標(biāo)準(zhǔn)品和第四工作標(biāo)準(zhǔn)品，其中，

所述第一工作標(biāo)準(zhǔn)品為1×10³copy/ml的以pUC57為載體的百日咳鮑特氏菌的基因片段重組質(zhì)粒；

所述第二工作標(biāo)準(zhǔn)品為1×10⁴copy/ml的以pUC57為載體的百日咳鮑特氏菌的基因片段重組質(zhì)粒；

所述第三工作標(biāo)準(zhǔn)品為1×10⁵copy/ml的以pUC57為載體的百日咳鮑特氏菌的基因片段重組質(zhì)粒；

所述第四工作標(biāo)準(zhǔn)品為1×10⁶copy/ml的以pUC57為載體的百日咳鮑特氏菌的基因片段重組質(zhì)粒。

12.根據(jù)權(quán)利要求10或11所述的試劑盒，其特征在于，所述百日咳鮑特氏菌的基因片段重組質(zhì)粒的DNA序列如序列表中SEQ ID NO.8所示。

13.一種如權(quán)利要求2-12中任一項(xiàng)所述的試劑盒在檢測(cè)百日咳鮑特氏菌中的應(yīng)用。