[發(fā)明專(zhuān)利]一種皮質(zhì)醇的核酸適配體及檢測(cè)皮質(zhì)醇的金標(biāo)試紙條

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710479899.3
• 申請(qǐng)日: 2017-06-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107356740A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-11-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 程克文;李斌
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 華測(cè)康諾（武漢）生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/531
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/531;G01N33/559
• 代理公司: 武漢藍(lán)寶石專(zhuān)利代理事務(wù)所(特殊普通合伙)42242
• 代理人: 常海濤

1.一種皮質(zhì)醇的核酸適配體，其特征在于：核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸適配體，其特征在于：5’端經(jīng)過(guò)巰基修飾。

3.一種與權(quán)利要求1所述的核酸適配體互補(bǔ)配對(duì)的互補(bǔ)探針A，其特征在于：核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的互補(bǔ)探針A，其特征在于：5’端經(jīng)過(guò)生物素修飾。

5.一種檢測(cè)皮質(zhì)醇的金標(biāo)試紙條，其特征在于：包含樣品玻璃纖維膜、核酸探針金標(biāo)墊、硝酸纖維膜、吸水玻璃纖維膜和塑料襯板；所述的核酸探針金標(biāo)墊上附著膠體金標(biāo)記的皮質(zhì)醇的核酸適配體；所述的硝酸纖維膜上劃有檢測(cè)線和參照線，檢測(cè)線由皮質(zhì)醇-牛血清蛋白偶聯(lián)物溶液劃成，參照線由結(jié)合了鏈霉親和素的生物素修飾的互補(bǔ)探針A溶液劃成；樣品玻璃纖維膜、核酸探針金標(biāo)墊、硝酸纖維膜、吸水玻璃纖維膜依次搭接粘貼在塑料襯板上，硝酸纖維膜的參照線靠近吸水玻璃纖維膜一端。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的金標(biāo)試紙條，其特征在于：所述的膠體金標(biāo)記的皮質(zhì)醇的核酸適配體通過(guò)包括如下步驟的方法制備：將醋酸緩沖液和TCEP溶液混合，再向其中加入權(quán)利要求2所述的核酸適配體，進(jìn)行巰基活化反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后向其中加入金納米粒子溶液，震蕩反應(yīng)0.5～1.5小時(shí)；再加入dATP，18～25℃震蕩反應(yīng)10～30分鐘后靜置20～40分鐘，再在2～8℃下靜置4～6小時(shí)；然后離心，沉淀即為膠體金標(biāo)記的皮質(zhì)醇的核酸適配體。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的金標(biāo)試紙條，其特征在于：所述的方法中，醋酸緩沖液的濃度為0.1～0.6mol/L，pH值4.0～6.0，用量1～5μL；TCEP溶液的濃度為1～10mmol/L，用量1～10μL；核酸適配體的濃度為1～100μmol/L，用量1～10μL；金納米粒子溶液的濃度為6～10OD值，金納米粒子粒徑為30～40nm，用量50～100μL；dATP的濃度為1～10μmol/L，用量50～100μL。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的金標(biāo)試紙條，其特征在于：所述的結(jié)合了鏈霉親和素的生物素修飾的互補(bǔ)探針A溶液通過(guò)包括如下步驟的方法制備：將40～80μL 1～10OD值權(quán)利要求4所述的互補(bǔ)探針A溶液和200～300μL 1～5mg/mL的鏈霉親和素溶液混合后在18～30℃下靜置1～3小時(shí)，再向其中加入500～600μL 0.001～1.000M pH值6.0～8.0的磷酸鹽緩沖溶液。

9.權(quán)利要求5～8任一所述的金標(biāo)試紙條的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：制備核酸探針金標(biāo)墊、劃有檢測(cè)線和參照線的硝酸纖維膜；將樣品玻璃纖維膜、核酸探針金標(biāo)墊、硝酸纖維膜和吸水玻璃纖維膜依次搭接粘貼到塑料襯板上。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于：相鄰兩粘貼物之間的重疊部分長(zhǎng)度為1～3mm。