[發明專利]一種轉化污染土壤中重金屬鎘的微生物制劑及其制備方法

有效

• 申請號: 201710479625.4
• 申請日: 2017-06-14
• 公開（公告）號: CN107058197B
• 公開（公告）日: 2020-11-06
• 發明（設計）人: 劉學端;柏連陽;劉宏偉;蔣慧丹;尹華群;梁伊麗;劉亞姿
• 申請（專利權）人: 中南大學;湖南省農業生物技術研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/16;B09C1/10;C12R1/72;C12R1/645;C12R1/01;C12R1/74
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所(普通合伙) 43114
• 代理人: 袁靖

1.一種轉化污染土壤中重金屬鎘的微生物制劑的制備方法，其特征在于，由以下兩個菌群混合后富集培養得到:

71.5％假絲酵母菌(Candida)、13.5％單胞瓶霉菌(Phialemonium)、10％圓紅東孢酵母菌(Rhodosporidium toruloides)、5％ 隱 球 菌 (Cryptococcus)的數量比例組成菌群 1；嗜酸氧化亞鐵硫桿菌(A .ferrooxidans)、嗜中高溫嗜酸古菌(F.thermophilum)、嗜熱硫氧化硫桿菌(S.thermosulfidooxidnas)、嗜鐵鉤端螺旋菌(L.ferriphilum)、氧化硫硫桿菌(A.thiooxidans)5個菌種按1:1:1:1:1的數量比例組成菌群2；假絲酵母菌(Candida)由近平滑假絲酵母(Candida parapsilosis)、熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)以及粗壯假絲酵母(Candida valida)組成，三種菌的數量比例為5:2:3；隱球菌(Cryptococcus)由羅倫特隱球菌(Cryptococcus laurentii)、維多利亞隱球酵母菌(Cryptococcus victoriae)和新型隱球菌(Filobasidiella bacillispora)組成，三種菌的數量比例為3:2:2。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，菌群中的各種菌在混合之前在含有鎘的培養基中進行馴化；馴化的具體步驟及條件如下：將菌置于100mL滅菌的含有0.5％‐1.5％9K培養基、4‰-12‰葡萄糖、4‰-9‰硫粉以及CdSO₄的培養基中，在轉速為150-200rpm溫度為22-27℃條件下馴化至少30代，馴化時CdSO₄的濃度梯度為0.5mmol/L，培養基中CdSO₄含量從0.5增加到15.0mmol/L。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，將菌群1、菌群2接種到富集培養基中，曝氣培養后，經過8—12次轉接培養后獲得微生物菌劑。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，將菌濃均為2.0×10⁷-3.5×10⁷個/mL的菌群1、菌群2和水按照體積比例3:2:5混合，初始接種量為2％‐5％到富集培養基中，曝氣培養后，將所培養的富集物以8％—15％的體積比例轉接到新鮮的培養基中，繼續曝氣培養，經過8—12次轉接培養后獲得微生物菌劑。

5.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于：富集培養基組成如下：7％-11％9K培養基+4‰-9‰酵母粉+4‰-12‰葡萄糖+4‰-9‰硫粉+0.3‰‐0.8‰磁黃鐵礦，將體系定容到50L；所述的9K培養基成分如下：蒸餾水1000mL，(NH₄)₂SO₄ 0.3g/L，K₂HPO₄ 0.05g/L，KCl0.01g/L，Ca(NO₃)₂ 0.001g/L，MgSO₄·7H₂O 0.05g/L；培養基不做高壓滅菌處理，直接將各組成成分加入曝氣柱中。

6.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，曝氣培養條件為：初始pH2.5—3.0，溫度20—30℃，曝氣量DO₂條件下富集培養1—3天。