[發(fā)明專利]菊芋不定芽誘導(dǎo)方法

在審

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• 申請日: 2017-06-21
• 公開（公告）號: CN107278889A
• 公開（公告）日: 2017-10-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 韋順華;梁勝
• 申請（專利權(quán)）人: 河池市智匯科技咨詢有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 柳州市集智專利商標(biāo)事務(wù)所45102
• 代理人: 韋永青

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及菊芋組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種菊芋不定芽誘導(dǎo)方法。

背景技術(shù)

菊芋，學(xué)名為Helianthus tuberosus（L.1753），又名洋姜、鬼子姜，是一種多年宿根性草本植物，原產(chǎn)北美洲，十七世紀(jì)傳入歐洲，后傳入中國，其地下塊莖富含淀粉、菊糖等果糖多聚物，可以食用，煮食或熬粥，腌制咸菜，曬制菊芋干，或作制取淀粉和酒精原料，宅舍附近種植兼有美化作用。

菊芋的繁殖方式有兩種，一是通過雙受精作用形成合子種子，即有性繁殖，二是通過地下塊莖的芽進(jìn)行無性繁殖。菊芋在自然條件下的結(jié)籽率和種子的萌發(fā)率極低，所以生產(chǎn)上通常使用塊莖進(jìn)行無性繁殖。無性繁殖的方法，使菊芋種子很難獲得，且發(fā)芽率極低，很難實現(xiàn)雜交育種。

隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展，更多的科研人員采用組織培養(yǎng)的方法來培養(yǎng)菊芋，然而菊芋愈傷組織獲得再生植株存在較大的困難，因此，菊芋的組織培養(yǎng)進(jìn)展依然緩慢，國內(nèi)主要是利用腋芽和莖尖進(jìn)行擴(kuò)繁以及用菊芋的塊莖和莖尖進(jìn)行體外誘變和多倍體誘變，但通過愈傷組織誘導(dǎo)形成完整植株的菊芋組培體系尚未見報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種菊芋不定芽誘導(dǎo)方法，本發(fā)明解決的技術(shù)問題是提供一種菊芋愈傷組織誘導(dǎo)方法。

為了解決上述問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

這種菊芋不定芽誘導(dǎo)方法以幼嫩的子葉作為外植體，暗培養(yǎng)至出現(xiàn)愈傷組織，采用負(fù)離子光觸媒處理8分鐘～10分鐘，再放置于濃度為70％的酒精浸泡10分鐘～15分鐘；接種至愈傷組織培養(yǎng)基上，設(shè)置培養(yǎng)溫度為22℃～26℃下，暗培養(yǎng)8天～15天；轉(zhuǎn)接至不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，設(shè)置培養(yǎng)溫度為24℃～27℃下，光照培養(yǎng)至長出不定芽；所述愈傷組織培養(yǎng) 基為MS培養(yǎng)基添加1～3mg/L6-芐基嘌呤、0.15～0.35mg/L椰子汁和25～35g/L蔗糖；所述不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基添加0.7～1.3mg/L萘乙酸、0.5～1.5mg/L肌醇、0.2～0.6mg/L泛酸。

上述方案中，更具體的技術(shù)方案還可以是：菊芋外植體在酒精中浸泡處理后，采用無菌水沖洗2次～5次。

進(jìn)一步的，不定芽培養(yǎng)基的制備方法為：將MS中除了瓊脂以外的成分混合，然后用蒸餾水定容，調(diào)節(jié)pH值至5～6.5，分裝至錐形瓶中，加入瓊脂，然后在0.1Mpa、121℃高壓滅菌20min，然后冷卻至60℃，在超凈工作臺中操作，加入萘乙酸、肌醇和泛酸，最后分裝到無菌的培養(yǎng)瓶中。

由于采用了上述技術(shù)方案，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下有益效果：

1、本發(fā)明愈傷組織培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基添加1～3mg/L6-芐基嘌呤、0.15～0.35mg/L椰子汁和25～35g/L蔗糖，不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基添加0.7～1.3mg/L萘乙酸、0.5～1.5mg/L肌醇、0.2～0.6mg/L泛酸，最后成功的生成不定芽，不定芽誘導(dǎo)率達(dá)15.5%以上，且重復(fù)性較好。

2、本發(fā)明采用負(fù)離子光觸媒處理山核桃莖尖，負(fù)離子光觸媒在光的照射下，具有極強(qiáng)的殺菌、防污自潔的功能，且不會損傷外植體，安全環(huán)保。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳述：

實施例1

本實施例菊芋不定芽誘導(dǎo)方法以幼嫩的子葉作為外植體，暗培養(yǎng)至出現(xiàn)愈傷組織，采用負(fù)離子光觸媒處理8分鐘，再放置于濃度為70％的酒精浸泡15分鐘，采用無菌水沖洗2次；接種至愈傷組織培養(yǎng)基上，設(shè)置培養(yǎng)溫度為22℃～26℃下，暗培養(yǎng)15天；轉(zhuǎn)接至不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，設(shè)置培養(yǎng)溫度為24℃～27℃下，光照培養(yǎng)至長出不定芽；所述愈傷組織培養(yǎng) 基為MS培養(yǎng)基添加1mg/L6-芐基嘌呤、0.15mg/L椰子汁和35g/L蔗糖；所述不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基添加0.7mg/L萘乙酸、0.5mg/L肌醇、0.2mg/L泛酸。

本實施例不定芽培養(yǎng)基的制備方法為：將MS中除了瓊脂以外的成分混合，然后用蒸餾水定容，調(diào)節(jié)pH值至5，分裝至錐形瓶中，加入瓊脂，然后在0.1Mpa、121℃高壓滅菌20min，然后冷卻至60℃，在超凈工作臺中操作，加入萘乙酸、肌醇和泛酸，最后分裝到無菌的培養(yǎng)瓶中。

本實施例不定芽誘導(dǎo)率為15.5%。

實施例2