[發明專利]基于球藻提取物的復配物及其制備方法

在審

• 申請號: 201710475601.1
• 申請日: 2017-06-21
• 公開（公告）號: CN107496465A
• 公開（公告）日: 2017-12-22
• 發明（設計）人: 周建波
• 申請（專利權）人: 蘭溪市沉默生物科技有限公司
• 主分類號: A61K36/05
• 分類號: A61K36/05;A61K47/42;A61K47/36;A61P37/04;C08B37/00
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙)11548
• 代理人: 李靜

技術領域

本發明涉及復配物制備技術領域，具體是一種基于球藻提取物的復配物及其制備方法。

背景技術

多糖是一類廣泛存在于動物細胞膜、植物和微生物細胞壁中的生物大分子，是構成生命的四大基本物質之一。近幾十年來研究發現多糖具有復雜的生物和生理活性，特別是近十幾年來隨著世界各國科學家對植物多糖分離純化、結構分析、免疫學及藥理學等方面研究的不斷深入，尋找一種資源相對豐富、成本低廉的植物多糖源已成為食品界、醫學界關注的熱點。海洋面積遼闊、海藻類植物來源豐富，其中除富含優質蛋白質、氨基酸、纖維素及礦物元素外，還含有多種生物活性多糖，并且海藻生存環境特異，海藻多糖具有獨特的生理活性。作為醫療、保健用品已越來越引起世界各國的重視，海藻多糖正逐步成為生物多糖的主要來源之一。

小球藻(ChlorellapyrenoidosaFACHB5)是一類普生性單細胞藻類。小球藻具有生態分布廣、可快速生長和繁殖、易于培養等優點，是地球上動植物中唯一能在20h增長4倍的生物，具有很高的應用價值。目前小球藻已經廣泛地應用在動物飼料、食品添加劑、醫藥制劑、美容產品等方面。

現有技術如授權公告號為CN104311685B的中國發明專利，公開了一種螺旋藻多糖及其提取方法，包括以下步驟：將螺旋藻粉懸濁液反復凍融破壁后，離心獲得細胞破碎液1和細胞碎片；在細胞破碎液1中加入硫酸銨至其飽和度為50％，鹽析沉淀后，離心去除藻膽蛋白，獲得上清液，將上清液與細胞碎片混勻，獲得細胞破碎液2；采用熱水浸提法獲取螺旋藻多糖粗提物；將粗提物加入到乙醇/硫酸銨雙水相體系中萃取，獲得具有較高純度的螺旋藻多糖的下相溶液；下相溶液經透析除鹽后，用SephadexG-150層析柱和DEAESephadexA-50陰離子交換柱洗脫，獲得純螺旋藻多糖溶液；冷凍干燥后，制備成純螺旋藻多糖成品。上述方法制備步驟繁瑣，且提取過程中多糖活性容易被破壞，得到的產品質量不高。

發明內容

本發明的目的在于提供一種制備步驟簡單，原料來源廣，價格低廉，提取率高的基于球藻提取物的復配物及其制備方法，得到的復配物中球藻多糖性質穩定，長期服用上述復配物可明顯提高免疫力。

本發明針對背景技術中提到的問題，采取的技術方案為：基于球藻提取物的復配物，成分及其重量份為球藻提取物20~40份、玉米淀粉50~70份、阿拉伯膠5~10份、羧甲基淀粉20~30份、維生素C15~30份和葉酸3~6份。

基于球藻提取物的制備方法，包括凍融-超聲處理、去蛋白、透析并醇沉、分離純化和復配物的制備。上述方法制得的復配物中球藻提取物的性質穩定，且復配物中各成分相互協同作用，可提高白細胞的變形運動速度，縮短白細胞從血液中到達病原體所在組織的時間；同時可提高白細胞的吞噬能力和分泌白細胞介素、干擾素、腫瘤壞死因子等多種細胞因子的能力。長期服用上述多糖后，感冒頻率下降，人體免疫力得到明顯的提高。復配物提高免疫力的效果均優于配方中任一單一成份。分離純化步驟為采用凝膠層析的方法對粗多糖進行分離純化，洗脫液為溶有活性多肽的水溶液。上述凝膠層析洗脫所用的洗脫液量少，有提高免疫力作用的功能多糖損失量少，洗脫的分離效果好。

活性多肽的含量為1~3g/L，活性多肽的氨基酸序列為SCASRCKSRCRACRRCKGYAAVSFGRCRCICKCFRC。上述活性多肽能明顯提高功能多糖的K值，對其他多糖的K值影響不大，從而有效的將功能多糖分離純化。功能多糖性質不穩定，容易受外界因素影響而失活，上述活性多肽可較好保護功能多糖的活性。

凝膠層析洗脫流速為0.2~0.7mL/min，收集在620nm處有吸收的洗脫液，濃縮并冷凍干燥得到球藻提取物。功能多糖在620nm處有較強吸收，且其他多糖在此處無吸收，根據這一特性對功能多糖進行富集。

凍融-超聲處理步驟為取小球藻藻泥，加入磷酸緩沖液，反復超聲凍融1~4次，離心取上清液，超聲功率為400~700W，每次超聲作用時間為4~7min。利用超聲波產生的空化作用、機械作用加速小球藻細胞壁的破碎，促進胞內物質的溶出，提高多糖的提取率。

磷酸緩沖液與藻泥質量比為12~18，緩沖液濃度為0.04~0.08mol/L，pH為7.0~8.5。功能多糖在上述磷酸緩沖液中的溶解度高，且能較好的保持功能多糖的活性。

去蛋白步驟為在上清液中加入2~5%的三氯乙酸溶液，直至不再出現白色沉淀，離心取上清液。三氯乙酸是一種有機酸，可以使溶液中的蛋白質變性沉淀。上述方法操作簡單、結果穩定、反應溫和，在除蛋白時能很好的保證多糖的活性。