[發明專利]一種桔橙指孢囊菌及其在調控微生物代謝物非達霉素中的應用

有效

• 申請號: 201710473850.7
• 申請日: 2017-06-21
• 公開（公告）號: CN107236686B
• 公開（公告）日: 2019-10-15
• 發明（設計）人: 陳曉霞;王蓓;趙萬忠;馮國棟;謝海軍
• 申請（專利權）人: 杭州華東醫藥集團新藥研究院有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P19/62;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種桔橙指孢囊菌(Dactylosporangium aurantiacum)FID1307及其應用，該菌種由中國典型培養物保藏中心保藏，保藏號為CCTCC NO：M2017311，保藏日期為：2017年06月07日。本發明還公開了一種由此菌株發酵制備非達霉素的方法。本發明提供的發酵工藝經大生產實踐，證明其發酵穩定、副產物少，大大地降低了后提取的難度，適宜工業化大生產，且獲得的非達霉素產品質量高。

技術領域

本發明涉及一種微生物及其在制藥領域中應用，具體地說是桔橙指孢囊菌通過調控微生物代謝獲得非達霉素的應用。

背景技術

非達霉素(fidaxomicin，商品名Dificid，曾用名OPT-80，PAR-101)，是具有18元環結構的大環內酯類抗生素，可由桔橙指孢囊菌hamdenensis亞種(Dactylosporangiumaurantiacumsubspecie hamdenensis)發酵而得，具體可由放線菌指孢囊菌NRRL 18085產生。桔橙指孢囊菌發酵得到的產物是一族與非達霉素結構非常相近的產物，稱為臺勾霉素(tiacumicins)，按結構不同，分別稱為臺勾霉素A、B、C、D、E和F。非達霉素為R構型的臺勾霉素B，具有新型的作用機制(結構式如下所示)。

非達霉素于2011年5月獲美國FDA批準上市，用于治療艱難梭菌(難辨梭狀芽孢桿菌，Clostridium difficile)感染相關性腹瀉(CDAD)。這是FDA近30年來批準的首個治療CDAD的藥物，歐盟2011年12月批準上市。

中國專利文獻03818016.2(發明名稱：臺勾霉素的制備)公開了制備臺勾霉素B的方法，所制備得到發酵產物中，含有較高的副產物、雜質(見附圖1)。

中國專利文獻201310208223.2(發明名稱：一種游動放線菌菌株及其在制備非達霉素中的應用)公開了其制備得到發酵產物的HPLC分析圖(見附圖2)，圖中顯示發酵產物中含有較多的副產物和雜質。

本領域普通技術人員均知道現有技術制備得的非達霉素發酵產物中含有較多的雜物、副產物，這些物質的存在將對后續的提純帶來很大的難度，對于一些在提純環節中很難去除的雜質，將嚴重影響最終藥品的質量。

發明內容

本發明的目的是針對上述問題，提供一種發酵穩定、副產物少的非達霉素產生菌，同時提供該菌株在制備非達霉素中的應用，以及具體的發酵制備方法。

本發明的目的是通過下列技術方案實現的：

一種桔橙指孢囊菌，分類命名為Dactylosporangium aurantiacum FID1307，由中國典型培養物保藏中心保藏(簡稱CCTCC)，保藏號為：CCTCC NO：M 2017311，保藏日期為：2017年6月7日。

所述的保藏號為CCTCC NO：M 2017311的菌株的菌落特征：菌落近圓形，表面平整，菌落直徑1～2mm，中間隆起，無分泌物和可溶性色素產生。

所述的保藏號為CCTCC NO：M 2017311菌株可應用于發酵制備非達霉素。該制備方法包括下列步驟：

a.菌株采用保藏編號為CCTCC NO：M 2017311的菌株；

b.將按常規方法制備的30％甘油菌絲冷凍管，按搖瓶種子培養基體積的3～5％的接種量接入搖瓶種子培養基，220～260rpm，培養2～3天，得搖瓶種子液；

將搖瓶種子液按種子罐培養基體積0.1～0.2％的接種量接種于種子罐，120～200rpm，培養3～4天，得罐種子液；

將罐種子液按發酵罐培養基體積5～15％的接種量接種于發酵罐培養基，150～200rpm，發酵培養9～12天，收集發酵液中的樹脂；