[發明專利]一種培養肝細胞的培養基及其制備方法

在審

• 申請號: 201710470100.4
• 申請日: 2017-06-20
• 公開（公告）號: CN107227291A
• 公開（公告）日: 2017-10-03
• 發明（設計）人: 翟岱青
• 申請（專利權）人: 青島金典生化器材有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種培養肝細胞的培養基，其特征在于，包括基礎培養基和添加在所述基礎培養基中的添加劑，所述添加劑的成分以終濃度計，包括：膽固醇2～10mg/L，硫辛酸30～100μg/L，硫酸軟骨素0.2-0.5mg/L，抗生素13-16μM，胰島素0.9-1.3mg/L，過氧化氫酶10-17mg/L，全反式維甲酸2～7μg/L，纖粘連蛋白14-22μg/L、脂質型牛血清蛋白180～420mg/L，2-巰基乙醇10～60μg/L，雷帕霉素3～12μg/L，葉酸3～9μg/L，黃體酮0.2～1.6mg/L，微量元素5～23μg/L，細胞生長因子20-35μg/L。

2.根據權利要求1所述的培養肝細胞的培養基，其特征在于，所述添加劑的成分以終濃度計，包括：膽固醇5～8mg/L，硫辛酸42～82μg/L，硫酸軟骨素0.2-0.5mg/L，抗生素13-16μM，胰島素0.9-1.3mg/L，過氧化氫酶10-17mg/L，全反式維甲酸3～6μg/L，纖粘連蛋白15～18μg/L、脂質型牛血清蛋白240～360mg/L，2-巰基乙醇25～42μg/L，雷帕霉素5～8μg/L，葉酸4～7μg/L，黃體酮0.7～1.3mg/L，微量元素5～23μg/L，細胞生長因子20-35μg/L。

3.根據權利要求1或2所述的培養肝細胞的培養基，其特征在于，所述基礎培養基為F12或RMPI 1640培養基。

4.根據權利要求1或2所述的培養肝細胞的培養基，其特征在于，所述細胞生長因子由表皮生長因子和肝細胞生長因子組成，所述細胞生長因子由表皮生長因子和肝細胞生長因子的重量比為1:(1.2～3.6)。

5.根據權利要求1或2所述的培養肝細胞的培養基，其特征在于，所述微量元素為微量金屬元素和/或維生素，所述微量金屬元素為鐵、銅、鋅、鈷、錳、鉻、硒、碘、鎳、氟、鉬、釩、錫、硅、鍶、硼、銣中的至少一種。

6.根據權利要求5所述的培養肝細胞的培養基，其特征在于，所述維生素為維生素A、維生素D、維生素E、維生素K、維生素B1、維生素B2、維生素B5、維生素B6、維生素B12、維生素B13、維生素B15、對氨基苯甲酸中的至少一種。

7.根據權利要求1或2所述的培養肝細胞的培養基，其特征在于，所述添加劑中還含有：L-谷氨酰胺、腺嘌呤、鳥嘌呤、尿嘧啶、胸腺嘧啶、胞嘧啶、核糖、脫氧核糖中的至少一種。

8.如權利要求1-7任意一項所述的培養肝細胞的培養基的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)向基礎培養基中加入膽固醇，硫辛酸，硫酸軟骨素，抗生素，胰島素，過氧化氫酶，全反式維甲酸，纖粘連蛋白、脂質型牛血清蛋白，2-巰基乙醇，雷帕霉素，葉酸，黃體酮，微量元素，細胞生長因子，混合均勻，得到混合體系1；

(2)將步驟(1)的混合體系調節pH至6.7-7.3，在溫度為35～38℃、二氧化碳濃度為5～60mL、濕度為60～85％的條件下培養2周；

(3)將步驟(2)的產物用微米濾膜過濾，除菌后，即得。

9.根據權利要求8所述的培養肝細胞的培養基的制備方法，其特征在于，所述微米膜為孔徑為0.1～0.3微米的濾膜。