[發明專利]一種免疫馬用的免疫佐劑

在審

• 申請號: 201710468372.0
• 申請日: 2017-06-20
• 公開（公告）號: CN107233568A
• 公開（公告）日: 2017-10-10
• 發明（設計）人: 范鐵炯;史小月;孫九如;柏偉
• 申請（專利權）人: 上海賽倫生物技術股份有限公司
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K39/395;A61P39/02;C12N15/81;C07K14/56;C07K16/18;C12R1/84
• 代理公司: 上海宏京知識產權代理事務所(普通合伙)31297
• 代理人: 王函

技術領域

本發明涉及用基因工程技術領域，具體涉及一種免疫佐劑，尤其涉及一種免疫馬用的免疫佐劑。

背景技術

抗破傷風免疫球蛋白是治療破傷風感染時能用的唯一有特效的解毒藥物。抗破傷風免疫球蛋白通常是用大型家畜免疫破傷風類毒素，待抗破傷風免疫抗體達到一定滴度時采取血漿提取抗體成份制備而成。當這些抗體注射入破傷風感染病人體內時，抗毒素可以很快中和相應的破傷風毒素。在破傷風感染治療中，抗破傷風免疫球蛋白發揮了無可替代的作用。抗破傷風免疫球蛋白是治療破傷風毒素中毒的最快速、最有效的藥物。

抗蛇毒血清是治療毒蛇咬傷時能用的唯一有特效的解毒藥物。抗蛇毒血清通常是用大型家畜免疫相關的蛇毒，待蛇毒抗體達到一定滴度時采取血漿提取抗體成份制備而成。當這些抗蛇毒血清注射入被毒蛇咬傷病人體內時，抗血清可以很快中和相應的蛇毒。在蛇傷治療中，馬抗蛇毒血清發揮了無可替代的作用。馬抗蛇毒血清是治療蛇傷的最快速、最有效的藥物。在我國每年有10萬余人被毒蛇咬傷，臨床上使用的抗蛇毒血清高達8萬人份。

制備這些免疫球蛋白和抗血清每年需要上千萬毫升高抗體滴度的馬血漿，因此每年馬匹的保有量達到數百匹。實際生產中，經常碰到免疫動物對抗原反應不一，有的馬匹能產生高滴度的抗體；有些馬匹對抗原刺激反應很弱，產生的中和抗體滴度很低甚至沒有抗體，這部分馬匹占整個免疫馬群的30%左右。即使馬匹能產生高效價的抗體，隨著采血漿的次數增加，馬匹體內的抗體滴度也會下降以致從這類馬中采取的血漿無法用于抗毒素、抗血清的生產。這部分馬匹無法用于生產，對產能影響很大。

免疫佐劑也稱佐劑或抗原佐劑，是一類單獨使用時一般無免疫原性，但是與抗原物質協同使用時能增強抗原物質免疫原性，增強機體免疫應答，或改變機體免疫應答反應類型的物質。

細胞因子(cytokine)是一類機體在免疫反應時產生的免疫調節物質。機體的免疫系統在受到抗原和各種免疫佐劑的刺激后，產生的應答性物質，這類物質統稱為細胞因子。天然的細胞因子為哺乳動物產生的蛋白質，多數為分子量較小的單體（1x10⁴-2.5x10⁴），也有天然狀態為二體或三體的。免疫反應通常是由多種細胞因子參與調節的。細胞因子對抗原遞呈細胞(APC)的作用有增加APC的數量和活化APC的功能兩個方面。

Interferon-alpha-1（干擾素α1）是一種增強自然殺傷細胞（NK細胞）、巨噬細胞和T淋巴細胞的活力，從而起到免疫調節作用的細胞因子。Interferon-alpha-1可以明顯提高機體的體液免疫機能。我們在使用馬Interferon-alpha-1預防馬病毒性傳染病時發現一群對抗原免疫反應差的、反復多次抗原免疫后血清抗體滴度低的馬匹，在注射Interferon-alpha-1后抗體效價明顯提高，這個發現提示Interferon-alpha-1可以作為一種免疫佐劑以提高馬匹抗血清的產量和質量。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種免疫馬用的免疫佐劑。該免疫佐劑設計巧妙，應用方便，使用后可以較大幅度提高被免疫動物的抗體水平，具有很大的實用價值。

為解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案：

一種免疫馬用的免疫佐劑，含有馬Interferon-alpha-1。

作為本發明優選的技術方案，所述的馬Interferon-alpha-1采用基因工程重組表達方法制得，即重組馬Interferon-alpha-1。所述的重組馬Interferon-alpha-1是根據中國發明專利申請號201710147935.6的說明書中記載的方法制備，所述重組馬Interferon-alpha-1的制備方法，包括如下步驟：

（1）將經過密碼子優化的編碼馬Interferon-alpha-1的核苷酸序列構建入酵母細胞誘導表達載體中；

（2）轉入酵母細胞進行培養后誘導表達；

（3）進行純化，從而獲得所述重組馬Interferon-alpha-1。

較佳地，步驟（1）中，所述核苷酸序列是如SEQ ID NO:2所示的序列；步驟（2）中，所述酵母細胞是畢赤酵母細胞（即Pichia pastoris細胞），更佳地，所述畢赤酵母細胞（即Pichia pastoris細胞）是GS115細胞。

所述酵母細胞表達載體是畢赤酵母表達載體，載體轉染入畢赤酵母細胞（Pichia pastoris細胞）后與酵母染色體重組整合入酵母染色體中。