[發明專利]一株表達耐熱α-淀粉酶基因的重組乳酸乳球菌及構建方法與應用

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• 申請號: 201710467579.6
• 申請日: 2017-06-20
• 公開（公告）號: CN109055286A
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發明（設計）人: 曹遠東;邱勛華;周華嬌;汪石糧;易松強;付杰
• 申請（專利權）人: 江西嘉博生物工程有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N9/28;C12N15/74;A23K50/30;A23K10/18;C12R1/46
• 代理公司: 南昌新天下專利商標代理有限公司 36115
• 代理人: 謝德珍

本發明涉及一種表達耐熱α?淀粉酶基因的重組乳酸乳球菌及構建方法與應用，該重組乳酸乳球菌的構建方法包括以下步驟：（1）合成超嗜熱古菌(Thermococcussp.HJ21)菌株產耐熱α?淀粉酶基因，在序列上游添加6個組氨酸的基因序列，并在其上下游分別引入NcoI和XbaI兩個限制性內切酶位點；（2）構建重組質粒：將耐熱α?淀粉酶基因克隆到乳酸乳球菌質粒pNZ8148并轉化到大腸桿菌MC1061；（3）重組質粒電轉化到乳酸乳球菌NZ9000中，得到表達耐熱α?淀粉酶的重組乳酸乳球菌。本發明中重組乳酸乳球菌誘導表達產物采用噴霧方式直接噴灑在飼料表面飼喂豬，既可發揮乳酸乳球菌促進增重和降低料重比等益生菌功效，又可發揮耐熱α?淀粉酶促進豬腸道消化淀粉類飼料的功效。

技術領域

本發明涉及一株表達耐熱α-淀粉酶基因的重組乳酸乳球菌及構建方法與應用。

背景技術

α-淀粉酶可分解淀粉分子鏈中的α-1,4-葡萄糖苷鍵，將淀粉分解成短鏈糊精、寡糖和麥芽糖和葡萄糖，是工業生產中應用最為廣泛的酶制劑之一，淀粉是動物能量的主要來源，飲料中的淀粉為動物提供大部分能量，而淀粉酶是淀粉消化的關鍵酶，在飼料中添加α-淀粉酶可以提高畜禽對淀粉類飼料的消化與利用，而耐熱α-淀粉酶除具有常溫淀粉酶的常規活性外，還有耐高溫，抗逆性強等特性，因此具有更加廣闊的應用前景。乳酸乳球菌是一類長期應用于食品發酵業的有益微生物，具有幫助消化、健康腸道、防止腹瀉等諸多優點，并已證明其為安全級微生物，無致病性。

發明內容

本發明其目的就在于提供一株表達耐熱α-淀粉酶基因的重組乳酸乳球菌及構建方法與應用，本發明中重組乳酸乳球菌誘導表達產物采用噴霧方式直接噴灑在飼料表面飼喂豬，既可發揮乳酸乳球菌促進增重和降低料重比等益生菌功效，又可發揮耐熱α-淀粉酶促進豬腸道消化淀粉類飼料的功效。

為實現上述目的而采取的技術方案是，

一種表達耐熱α-淀粉酶基因的重組乳酸乳球菌，重組乳酸乳球菌為NZ9000。

一種表達耐熱α-淀粉酶基因的重組乳酸乳球菌的構建方法，包括以下步驟：

（1）合成超嗜熱古菌(Thermococcussp.HJ21)菌株產耐熱α-淀粉酶基因，在序列上游添加6個組氨酸的基因序列，并在其上下游分別引入NcoI和XbaI兩個限制性內切酶位點；

（2）構建重組質粒：將耐熱α-淀粉酶基因克隆到乳酸乳球菌質粒pNZ8148并轉化到大腸桿菌MC1061；

（3）重組質粒電轉化到乳酸乳球菌NZ9000中，得到表達耐熱α-淀粉酶的重組乳酸乳球菌。

一種表達耐熱α-淀粉酶基因的重組乳酸乳球菌的應用，所述的表達耐熱α-淀粉酶基因的重組乳酸乳球菌誘導表達產物采用噴霧方式直接噴灑在飼料表面飼喂豬，既可發揮乳酸乳球菌促進增重和降低料重比等益生菌功效，又可發揮耐熱α-淀粉酶促進豬腸道消化淀粉類飼料的功效。

有益效果

與現有技術相比本發明具有以下優點。

本發明表達耐熱α-淀粉酶基因的重組乳酸乳球菌誘導表達產物采用噴霧方式直接噴灑在飼料表面飼喂豬，既可發揮乳酸乳球菌促進增重和降低料重比等益生菌功效，又可發揮耐熱α-淀粉酶促進豬腸道消化淀粉類飼料的功效。

附圖說明

以下結合附圖對本發明作進一步詳述。

圖1為篩選耐熱α-淀粉酶基因與pNZ8148質粒連接的陽性克隆子電泳圖（引物α-AMY-F和α-AMY-R，產物約945bp）；

圖2為乳酸乳球菌NZ9000表達α-淀粉酶蛋白的western blot圖（蛋白大小在34KD左右）；

圖3為pNZ8148質粒圖譜。