[發明專利]一種肝細胞癌輔助診斷或者疾病監測試劑盒及應用

在審

• 申請號: 201710466849.1
• 申請日: 2017-06-20
• 公開（公告）號: CN107475362A
• 公開（公告）日: 2017-12-15
• 發明（設計）人: 彭麗;李官成;袁小青;蔣斌元;張朝陽;李文玲;劉朝陽;孫瑞利;潘曦;張雅琴
• 申請（專利權）人: 中南大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 長沙正奇專利事務所有限責任公司43113
• 代理人: 盧宏,周棟

技術領域

本發明屬于腫瘤分子生物學領域，具體涉及一種肝細胞癌輔助診斷或者疾病監測試劑盒及應用。

背景技術

肝細胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是一種常見的惡性腫瘤，據2012年報告估計在世界范圍內，一年中新發癌癥病例78.2萬例(僅中國就占有50％)；肝細胞癌同時也是全球癌癥死亡的第三大死因，2012年有近74.5萬例患者死亡。盡管肝癌的患病率不斷增加，但仍缺乏有效的治療手段。同時，肝癌是一個具有毀滅性的疾病，發達國家和發展中國家的5年總體生存率(overall survival，OS)通常<20％；并且死亡率與發病率的比值為0.95，再次表明肝細胞癌患者的死亡極高而生存率低。肝細胞癌是一種臨床預后極度不佳的致命性疾病，因此發現肝細胞癌診斷和疾病監測生物標志物是很有必要的。

長鏈非編碼RNAs(long non-coding RNAs，lncRNAs)被廣泛地描述為長度超過200個核苷酸(nucleotides，nt)的RNA分子，其具有許多mRNA的結構特征，包括含有poly(A)尾、5’-cap和promoter結構，而沒有保守的開放閱讀框。目前認為lncRNAs缺乏蛋白質編碼能力，可以定位于細胞核和細胞質中。隨著高通量測序和其他新興研究技術的興起，lncRNAs的生物學功能逐漸得到廣泛了解。越來越多的證據表明，lncRNAs在廣泛的細胞過程中起作用，包括細胞生長、細胞存活、細胞遷移、細胞侵襲和細胞分化等?？傊?，lncRNAs可為腫瘤的治療提供新的靶點，也有望成為腫瘤診斷和疾病監測新的生物標志物。

腫瘤基因組及其相關數據庫的發展給癌癥研究者提供了極大的便利，大量的腫瘤基因信息和在線分析工具使得電子克隆(in silico cloning)成為篩選癌癥相關新基因眾多方法中性價比最高的一種。最近我們利用電子克隆技術結合cDNA末端快速擴增技術(rapid-amplification of cDNA ends，RACE)，成功克隆和拼接獲得一個肝細胞癌相關新基因及其全長，并使用生物信息學預測發現該基因是一個長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)。

發明內容

本發明旨在克服現有技術的不足，提供一種肝細胞癌輔助診斷或者疾病監測試劑盒及應用。

發明人利用原位雜交的方法在肝細胞癌及癌旁組織中，檢測了該長鏈非編碼RNA的表達情況，結果顯示lncRNA HCCL5(該長鏈非編碼RNA基因HCCL5的序列如SEQ ID NO.4所示，將其在NCBI數據庫中進行比對，發現其是在LOC105371083的基礎上5’延長了86個核苷酸，3’增加了多聚A尾。)在肝細胞癌組織中的表達陽性率高于癌旁組織(p<0.05)。因此針對該lncRNA 的檢測試劑可用于肝細胞癌的輔助診斷。隨后進一步擴大樣本，采用原位雜交檢測人肝癌組織及正常肝組織中lncRNA HCCL5的表達，結果顯示，與Normal liver tissue組相比較，lncRNA HCCL5在Bile duct adenocarcinoma、Hepatocellular carcinoma及Metastatic adenocarcinoma中的表達陽性率顯著增加，且呈現依次上升的趨勢(p<0.05)。同時，與人肝細胞癌組織G1-2期相比，lncRNA HCCL5在人肝細胞癌組織G3期的表達陽性率增加。此外，與女性肝細胞癌組織相比，lncRNA HCCL5在男性肝細胞癌組織中的表達陽性率增加(p<0.05)，這與肝細胞癌在男性女性中的發病率比例基本一致。因此針對該lncRNA的檢測試劑不僅可用于肝細胞癌的輔助診斷，且針對該lncRNA的檢測試劑還可用于肝細胞癌的疾病監測。

因此，本發明所述肝細胞癌輔助診斷或者疾病監測試劑盒中包含原位雜交檢測長鏈非編碼RNA基因HCCL5表達的寡核苷酸探針。

所述原位雜交檢測長鏈非編碼RNA基因HCCL5表達的寡核苷酸探針包括如下寡核苷酸探針中的至少一種：

5’-ACCTA CAGAG TATGA TTATT CATCT TTACA TTGCC-3’(SEQ ID NO.1)；

5’-TCTAG ACCTT TGCTT GTGTT GTTTG TTCTC TGCCT-3’(SEQ ID NO.2)；

5’-CTTCC AGACC AGTTT GGTGG TGCCC CTAAT CCACA-3’(SEQ ID NO.3)。